| 查看: 1828 | 回复: 1 | |||
[求助]
蓝藻DNA提取
|
|
我在提取蓝藻DNA时，出现大量短片段DNA，长片段DNA量很少，请教下原因。 直接取的蓝藻，由于难以离心沉淀蓝藻，所以蓝藻都是浮在湖水表面上，我吸取约500ul 的含有蓝藻的湖水到ep管中，吸取并弃掉约400ul的湖水，然后开始提取DNA。 1. 加入溶菌酶消化液300ul 和300ul裂解缓冲液（终浓度为10mg/ml，Nacl 100 mmol/L，Tris-Hcl 50mmol/L， EDTA 100 mmol/L pH8.0）在分子杂交仪器中37度旋转颠倒3h。 2. 加入蛋白酶K（20mg/ml Tris-Hcl 50 mmol/L，Ca(CH3COO)2 1.5 mmol/L）3ul，37度水浴2h. 3. 94度水浴10min，灭活蛋白酶K，冷却到室温。 4. 加入100ul 5mM Nacl，13000rpm 离心5min，出去细胞碎片。 5. 将上清转移到新的ep管中，加入600ul 异丙醇沉淀，室温放置10min，13000rpm 离心10min。 6. 70%乙醇洗涤4次，室温烘干10min 7. 加入水溶解 由于这个DNA量很少，因此无法用苯酚氯仿抽提，因而直接沉淀了，我想知道为什么会出现100到500的短片段，以及改进的方法，谢谢了！ Marker 左边是Hind 3，右边是DL2000  gqy 2015-04-22 10hr 22min.jpg |
回复此楼» 猜你喜欢
筑牢营养安全线：以精准检测，护健康基石
已经有0人回复
-
推荐一些20种氨基酸检测的实际应用案例
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有149人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 求指导！要测序，长度为1500左右，是pcr产物直接测序好还是连接转化测序比较好？
已经有9人回复
- 动物组织研磨和裂解问题
已经有13人回复
- 请问一下，有谁用保温瓶装过液氮
已经有49人回复
- 酵母液氮研磨破壁细节
已经有5人回复
- 关于蓝藻的几种生长方式
已经有4人回复
- 关于培养基灭菌问题
已经有12人回复
- 有用过PI染蓝藻细胞，然后用流式细胞仪检测细胞周期的吗？
已经有13人回复
- RNA提取结果分析
已经有10人回复
- 样品先用液氮研磨，再称取的话，怎么操作？
已经有11人回复
- 经液氮研磨处理后蛋白质失活
已经有6人回复
- 样品先液氮研磨，再称取的话，怎么操作？
已经有9人回复
- 天根试剂盒提取，液氮研磨，DNA 提取不出来
已经有6人回复
- 做环境微生物，如果采集的水样不能及时过滤膜，该如何处理？
已经有7人回复
- 蓝藻DNA提取，液氮研磨
已经有21人回复
- 求助：粪便中微生物细胞的提取方法？
已经有4人回复
- 怎么做基于KEGG的生物通路富集分析？
已经有9人回复
- 原核生物 RNA提取
已经有17人回复
- 蛋白破碎后，上清的活性很低
已经有24人回复
- 提水稻RNA，测出的OD值偏低，求指教
已经有8人回复
- 求蓝藻（蓝细菌）的细胞壁破碎方法
已经有13人回复
- 我的放线菌细胞壁很难破，求助各位大虾
已经有11人回复
- 【求助】底泥采样
已经有10人回复
- 【求助/交流】求助植物蛋白提取试剂盒
已经有5人回复
- 【转帖】关于细菌超声破碎的一些经验总结
已经有13人回复
2楼2016-10-31 17:26:36