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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » 琼脂糖凝胶怎么才能跑得好看一些呢？
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pxxfntrt

木虫 (小有名气)

[交流] 琼脂糖凝胶怎么才能跑得好看一些呢？

在做化合物对TopoI抑制活性的测定，DNA是pBR322，目前的结果：
琼脂糖凝胶怎么才能跑得好看一些呢？
琼脂糖凝胶怎么才能跑得好看一些呢？-1
琼脂糖凝胶怎么才能跑得好看一些呢？-2
琼脂糖凝胶怎么才能跑得好看一些呢？-3
1×TAE中120V跑了50min（第一张35min），再用EB染色，条带都出现这样的扭曲，是我加样的问题，还是胶的问题？或者电泳条件不适合？
求教~~~
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1楼 2015-04-16 14:55:10
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luwei13566

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
前两张图不是胶和电泳buffer的问题，你的marker还是非常清晰的，问题出在你样品本身，特别是第一张图你X点样孔质粒跑成那个样子很有问题，你的质粒是怎么提的手提还是试剂盒？loading buffer有问题没有？点样的时候样品与buffer混匀了没？

第二张图我感觉其实规律都已经出来了，就是电压有点大或者是质粒有杂质或者是点样的时候没点均匀

第三张图明显是你电泳buffer的问题，建议更换TAE buffer

第四张图这种带型很可能是电压过大，当然也不排除胶和buffer的问题，建议120V跑出点样孔后换80V跑样，你一般加样有怎样的习惯？
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大家相互帮助哈
10楼2015-04-21 13:25:18
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普通回帖

sh_9153

银虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
pxxfntrt: 金币+3, 调低了电压，有点改善，可能还有其他的原因 2015-04-21 11:12:38
想要跑的好看一点~
1.琼脂糖溶解确定完整，也就是说适当增加加热时长，在沸腾后多加热10S左右
2.电伏数降低，90V-100V应该就可以了，电伏数120容易跑扭曲
3.确保梳子干净，也就是保证胶孔平整
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2楼2015-04-16 15:33:18
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五维度的爱

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
可以换TBE用一下
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3楼2015-04-20 14:43:30
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wasxnbe
4楼2015-04-20 15:17:48
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墨尔本机器

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
重新配置电泳缓冲液吧，应该就能解决
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5楼2015-04-20 20:00:28
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8wangle
6楼2015-04-20 20:25:36
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pxxfntrt

木虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 五维度的爱 at 2015-04-20 14:43:30
可以换TBE用一下

跑的是pBR322，用TAE会更好，而且实验室里没TBE
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7楼2015-04-21 11:13:50
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pxxfntrt

木虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 墨尔本机器 at 2015-04-20 20:00:28
重新配置电泳缓冲液吧，应该就能解决

是指电泳槽的缓冲液换成新的，还是50x储液重新配，整体换成新的？
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8楼2015-04-21 11:15:59
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王欣龙0817
9楼2015-04-21 11:35:34
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