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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » 琼脂糖凝胶怎么才能跑得好看一些呢？
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墨尔本机器

金虫 (小有名气)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
pxxfntrt: 金币+2 2015-04-22 17:03:27
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8楼: Originally posted by pxxfntrt at 2015-04-21 11:15:59
是指电泳槽的缓冲液换成新的，还是50x储液重新配，整体换成新的？...

储备液没过期就没关系，换电泳槽的电泳液
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11楼2015-04-21 15:25:16
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pxxfntrt

木虫 (小有名气)
引用回帖:
11楼: Originally posted by 墨尔本机器 at 2015-04-21 15:25:16
储备液没过期就没关系，换电泳槽的电泳液...

事实上我每次跑用的都是新稀释的TAE，说不定真的过期了
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12楼2015-04-22 10:54:04
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pxxfntrt

木虫 (小有名气)
引用回帖:
10楼: Originally posted by luwei13566 at 2015-04-21 13:25:18
前两张图不是胶和电泳buffer的问题，你的marker还是非常清晰的，问题出在你样品本身，特别是第一张图你X点样孔质粒跑成那个样子很有问题，你的质粒是怎么提的手提还是试剂盒？loading buffer有问题没有？点样的时候 ...

点样时候就对准加样孔的中间，一点点加进去，我确实怀疑自己加样没加好，但查了很多文献都没对点样有什么要求，关注点都在胶、Buffer和点泳条件上。
点样要均匀的话有什么要注意的吗？
120V确实高了，最近用1000V跑了一次，marker没问题，样品条带的变形稍有减小，但应该不是主要原因，可能得重配TAE了。
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13楼2015-04-22 10:54:31
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luwei13566

木虫 (正式写手)
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小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
pxxfntrt: 金币+10 2015-04-22 16:56:08
引用回帖:
13楼: Originally posted by pxxfntrt at 2015-04-22 10:54:31
点样时候就对准加样孔的中间，一点点加进去，我确实怀疑自己加样没加好，但查了很多文献都没对点样有什么要求，关注点都在胶、Buffer和点泳条件上。
点样要均匀的话有什么要注意的吗？
120V确实高了，最近用1000 ...

1.你的marker是没有问题的，一般胶出问题主要出在琼脂糖的品质，溶解胶用的TAE，倒胶的时候胶是否过热，胶倒的是否均匀这几点，前两张图从marker判断我认为你的琼脂糖质量还是可以的，但是胶如果不太均匀比如说有气泡或者倒胶的时候胶非常热，如果用的电压再比较大跑出来的带型自然就很不好看。
2.加样没有太大的名堂，对准点样孔中间缓慢轻柔的点进去就好，一般点样出问题更可能是你的样品和loading buffer混合比例不合适，buffer加的少会漂样，加的太多会让样品粘性太大也影响带型。
3.如果其他方面没有问题电压是不会单独出问题的，我感觉其他步骤出了问题电压再比较大会把问题给放大。
4.你的样品都是质粒吧，确定你的质粒很纯吗？点样量也有点大吧~，下次跑可以去问同事借一个确定跑出来带型正常的质粒来做个对照来排除一下是否样品有没有问题。
5.你的TAE从第三张图上看肯定有问题，重新配一下吧
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大家相互帮助哈
14楼2015-04-22 12:30:42
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卡卡罗特zxg

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
凝胶时间长一点，1h以上试试看。
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15楼2015-04-22 14:11:53
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