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路尽繁华

铜虫 (小有名气)

[求助] 质粒DNA总是降解 已有3人参与

实验提取质粒载体DNA,用的takara试剂盒,按照步骤提取,只是p1溶液未加RNAse A,结果提出的质粒,再电泳检测时比较正常,条带也亮(但条带下方会出现降解痕迹)。不知什么原因一?
      将提取的质粒用内切酶酶切,检测质粒时,有些同批次的质粒完全降解(电泳没条带),有些质粒检测条带还在,不知什么原因二?
          将经检测正常的质粒再进行双酶切,结果总是降解(没有条带),不知什么原因三?
     求大神帮助,指导指导!

质粒DNA总是降解
IMG_20150410_195908.jpg
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小赖赖来也

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2015-04-14 08:32:00
我也有这种情况,酶切质粒有降解而且挺严重的,不过还是有条带的。不知原因,困惑了很久了

[ 发自小木虫客户端 ]
2楼2015-04-11 18:51:09
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路尽繁华

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 小赖赖来也 at 2015-04-11 18:51:09
我也有这种情况,酶切质粒有降解而且挺严重的,不过还是有条带的。不知原因,困惑了很久了

酶切都降解了大部分,回收率又低,简直没法做了
3楼2015-04-11 20:11:30
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527219179

新虫 (初入文坛)

质粒下边模糊的东西就是RNA,属于RNA污染。
4楼2015-05-04 11:51:24
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sunflowersun

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

是不是得用RNA酶清除一下
5楼2015-05-04 11:59:38
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rhjilio

新虫 (小有名气)

我提取的质粒没有问题!为什么一酶切就有问题尼?

发自小木虫Android客户端
6楼2018-01-15 09:54:13
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drwhoknowss

荣誉版主 (正式写手)

【答案】应助回帖

有一种可能是,内切酶的STAR活性。切的时间不要太长,或者换成HF的酶试试
Progress in science depends on new techniques, new discoveries and new ideas, probably in that order. -- Nobel laureate Sydney Brenner
7楼2018-01-15 12:59:36
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