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guaidiandian新虫 (小有名气)
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[求助]
Nde1和BamH1双酶切问题求助已有5人参与
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| 本人用PRI101AN构建过表达载体，选用的内切酶是Nde1和BamH1，Buffer用的是Tango，体系是质粒/目的片段22微升，Buffer6微升，内切酶各一微升，37度酶切10小时左右，然后用连接酶连接，但是做了几次转化都没有出现菌落，不知啥地方出现在了问题，求助大神~~~~ |
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【答案】应助回帖
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感谢参与，应助指数 +1
guaidiandian(西门吹雪170代发): 金币+3, 鼓励回帖交流 2015-02-02 21:11:54
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guaidiandian(西门吹雪170代发): 金币+3, 鼓励回帖交流 2015-02-02 21:11:54
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本人用PRI101AN构建过表达载体，选用的内切酶是Nde1和BamH1， 1, 确定载体里没有这两个酶的酶切位点 Buffer用的是Tango， 2.确定这个BUFFER是两个酶通用 体系是质粒/目的片段22微升，Buffer6微升， 3. 确定质粒和片段总量配比合适，而不是以体积描述 内切酶各一微升，37度酶切10小时左右 4，说明书上要求酶切这么长时间吗？？ 5，没有菌落，说明没有连上，可能是，酶切没问题，但是连接酶有问题，也可能是最开始构建载体时载体就有问题 |
6楼2015-02-02 12:58:41
7楼2015-03-24 09:02:01
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8楼2016-03-25 11:20:41