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guaidiandian

新虫 (小有名气)

[求助] Nde1和BamH1双酶切问题求助 已有5人参与

本人用PRI101AN构建过表达载体,选用的内切酶是Nde1和BamH1,Buffer用的是Tango,体系是质粒/目的片段22微升,Buffer6微升,内切酶各一微升,37度酶切10小时左右,然后用连接酶连接,但是做了几次转化都没有出现菌落,不知啥地方出现在了问题,求助大神~~~~
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浅语8905

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
确定切开了吗?如果都是线性的应该可以连接上呀,会不会是连接酶有问题呢?
5楼2015-02-02 12:28:17
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still2008

至尊木虫 (著名写手)

破碎世界的守护者

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
电转化吗?感受态细胞有没有问题?有没有阳性对照?

[ 发自小木虫客户端 ]
有时一本正经,有时胡言乱语。
2楼2015-02-01 13:12:50
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guaidiandian

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by still2008 at 2015-02-01 13:12:50
电转化吗?感受态细胞有没有问题?有没有阳性对照?

转化DH5a大肠杆菌,阳性对照没有问题长了满满一板子。
3楼2015-02-01 13:16:39
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lihe131

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
是不是图谱上NdeI 和BamHI酶切位点离得太近了?如果离得太近了就分开切试试看。
祝顺利!
4楼2015-02-01 14:01:31
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