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月落星沉

银虫 (初入文坛)

[求助] 如何判断大肠杆菌有没有被污染? 已有3人参与

老板叫我拿大肠杆菌做葡萄糖降解的实验,从别人那里拿来了一株E.coli,先用LB活化培养了2次,闻到了大肠杆菌常有的那种臭臭的味道。
然后清洗菌体3次后转接到以葡萄糖为唯一碳源的培养基中,长得比较慢,臭味也比较淡,但从第二天开始肉眼能看见浑浊但菌体浓度不是很大,后面在摇床上放了3天,菌体浓度没有很明显的变化。

我不确定这株大肠杆菌是不是真的能以葡糖为唯一碳源生长,就把菌体又清洗了3次转接到以葡萄糖为唯一碳源的培养基中,这次开始2天菌体基本没有生长(OD600从0.07升到0.08),我一着急就中途向培养基中添加了一次葡萄糖,一天半后OD600变为1.8,但我没有闻到大肠杆菌那种特有的气味,而有一种淡淡的酸味,不知道这一系列操作过程中是不是被污染了。

有没有什么快速简单的方法能判断有没有被污染?RNA测序对我来说不大现实。
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ccdbaobao

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

将菌液做10倍梯度稀释,然后涂个板不就知道了么,染菌的话长出的菌落形态会不一样的。而且根据你的描述菌液有酸味,有可能是葡萄糖被发酵成乳酸了,如果真是这样那就是污染了产乳酸的细菌,可以将菌液在MRS平板上涂板,看是否能分离的出乳酸菌。如果平板上长出的菌落肉眼实在不好区分,还是建议PCR扩增一下16sDNA,送测。
4楼2015-02-03 11:32:10
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wlw1002

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
laozuzunzhe: 金币+1, 鼓励应助! 2015-01-31 20:44:18
月落星沉: 金币+20, 有帮助 2015-02-03 16:13:38
把你的培养物在固体平板上划线分离,革兰氏染色,镜检,与原菌种对比,能够大致判断出来是否污染。
2楼2015-01-30 14:44:12
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沙暴我爱罗0

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

我认为你可以将你的菌种在平板上养一养,长起来后提DNA,P出16SrDNA,然后测序。根据序列吸收峰图谱就可以看出到底污染了没有。
我平时是这样来检测我的东西有没污染的。嘿嘿。。。。多指教。
nopainsnogains
3楼2015-02-03 01:05:15
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