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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 稀释涂布分离大肠杆菌
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牧炀

金虫 (小有名气)

[求助] 稀释涂布分离大肠杆菌 已有1人参与

最近在做血红蛋白的抑菌机理实验，需要用到大肠杆菌稀释涂布分离操作  但是对于微生物这一块不是很懂，所以想请教各位虫子。
我遇到的问题如下：
1、怎么计算大肠杆菌原液里的细菌数，原液是放在4℃冰箱里的，要考虑在我检测期间细菌的生长嘛？老师说用血球计数板……

2、我倒平板进行涂布分离，从10的-7次分离到10的-9次，每次稀释前会振荡摇匀，然后移液枪吸取60μl菌液进行涂布，但平板上总是长成一片，并没有出现30-300个可见的但菌落，求怎么解决以及各位有做过相关实验的虫子的建议。


谢谢。在线等……
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1楼 2013-09-02 14:35:05
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wmwnyxt

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
牧炀: 金币+2, ★有帮助, 自己没有考虑到菌落蔓延的问题，很感谢 2013-09-02 16:32:10
laozuzunzhe: 金币+3, good！ 2013-09-03 21:55:36
菌体在4度基本处于休眠状态，检测期间基本不要考虑，要制成菌悬液的。
倒平板的温度要适当50-55度，涂布之前要注意烘干或吹干平板中的多余的水分，涂布之后，不要马上倒置培养，稍等一会，让液体渗入后，在培养。以防止出现菌落蔓延的情况。
再有保证以上的步骤后，你可以试试10的-10.
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Ifyouwanttocatchupwiththepaceoflife,youshouldfullfillyourselfatfirst
2楼2013-09-02 16:16:57
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牧炀

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by wmwnyxt at 2013-09-02 16:16:57
菌体在4度基本处于休眠状态，检测期间基本不要考虑，要制成菌悬液的。
倒平板的温度要适当50-55度，涂布之前要注意烘干或吹干平板中的多余的水分，涂布之后，不要马上倒置培养，稍等一会，让液体渗入后，在培养。以 ...

谢谢你的回答。

请问在倒平板的时候水汽在盖子上凝聚的话怎么除掉。

刚才我做了大肠杆菌的血球计数，发现在10的-7次的时候就已经足够稀了，可是我平板上还是这么多菌。
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3楼2013-09-02 16:31:04
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wmwnyxt

金虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 牧炀 at 2013-09-02 16:31:04
谢谢你的回答。

请问在倒平板的时候水汽在盖子上凝聚的话怎么除掉。

刚才我做了大肠杆菌的血球计数，发现在10的-7次的时候就已经足够稀了，可是我平板上还是这么多菌。...

所以要控制倒板的温度，涂布前要烘干水分啊。
，你也可以看看关于控制菌落蔓延的资料，记得有用陶瓦盖的。
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Ifyouwanttocatchupwiththepaceoflife,youshouldfullfillyourselfatfirst
4楼2013-09-02 16:38:59
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mizhoulong

木虫 (著名写手)

环境卫生、微生物学

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
laozuzunzhe: 金币+3, 鼓励热心应助！ 2013-09-03 21:55:52
牧炀: 金币+3, ★★★很有帮助, 谢谢。 我以前经常不注意冷凝的温度，谢谢提醒 2013-09-04 18:06:24
1.血球计数器，要有一定的微生物实验基础，要有显微镜，放大1000X的油镜，
还有一个简单的方法，就是大肠杆菌军玄烨2（PBS）在600nm吸光度下，OD=1，对应10E9/mL,不过这个不是很准。

2.两个原因，一个是平板上有冷凝水，另一个是菌液浓度很高，看你的情况应该是冷凝器水造成的。
控制冷凝水，琼脂要凉到50度，刚好不凝的时候倒，然后放在安全柜中静置半小时，放到温箱中培养24或48h，一是为了“烘干”冷凝水，二是为了排除污染。

加入60微升菌液，均匀涂布，涂布后静置半小时，倒置于温箱中培养即可。
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环境卫生、微生物学、卫生应急
5楼2013-09-03 07:58:28
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飘零

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

取样60ul？？？

这个取样基数有点奇怪

是不是取成600ul了？？要是60ul没问题那取10ul试试
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眼睛一闭一睁,一堂课过去了：眼睛一闭不睁,上午就过去了.人生最痛苦的事你知道是什么吗?是下课了,但人没醒,人生最最痛苦的事你知道是什么吗?是人醒了,但没下课.
6楼2014-06-25 11:16:27
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