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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 平板计数法测定肠道菌群
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uzzshadow

银虫 (初入文坛)

[求助] 平板计数法测定肠道菌群

我要做肠道菌群的测定，主要测定肠道各个菌的数量，采用平板计数法，取的肠道内容物怎样保存效果最好，如果放到-20摄氏度的冰箱中会影响实验效果吗？
求解！谢谢！
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uzzshadow

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1楼 2011-06-17 11:12:51
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

caisanrenju

木虫 (正式写手)
不知LZ要测哪几种肠道菌，是好氧菌还是厌氧菌？
如果是厌氧菌，建议不要保存，直接计数。
如果是好氧菌，可以保存，但最好不要-20C，保存后的影响较大。我们实验室的保存方法是：取肠道内容物后，用缓冲蛋白胨水（20%甘油）10倍稀释，震荡均匀后，保存至-80C，30天内菌群变化较小。

PS：LS提出的4C保存方法，只可过夜保存，而且仅限于检测好氧菌
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uzzshadow uzzshadow
7楼2011-06-20 17:01:00
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普通回帖

guanhongmin

木虫 (著名写手)
先用缓冲液稀释，后置于0-4度冰箱保存，仅供参考
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吾志所向一往无前，愈挫愈勇再接再厉！
2楼2011-06-18 17:56:39
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豆豆菜虫

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

uzzshadow(金币+5): 2011-06-19 00:33:35
引用回帖:
Originally posted by uzzshadow at 2011-06-17 11:12:51:
我要做肠道菌群的测定，主要测定肠道各个菌的数量，采用平板计数法，取的肠道内容物怎样保存效果最好，如果放到-20摄氏度的冰箱中会影响实验效果吗？
求解！谢谢！

应该会吧，因为肠道微生物本身就是温血性的，温度太低的话可能会影响某些不耐冷的菌群，建议是放在保鲜的那层，也就是0~4度得~~~
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很多事，不是我想，就能做到的。很多东西，不是我要，就能得到的。
3楼2011-06-18 18:54:41
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uzzshadow

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by guanhongmin at 2011-06-18 17:56:39:
先用缓冲液稀释，后置于0-4度冰箱保存，仅供参考

谢谢了
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4楼2011-06-19 00:38:19
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uzzshadow

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by 豆豆菜虫 at 2011-06-18 18:54:41:
应该会吧，因为肠道微生物本身就是温血性的，温度太低的话可能会影响某些不耐冷的菌群，建议是放在保鲜的那层，也就是0~4度得~~~

谢谢！！
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uzzshadow
5楼2011-06-19 00:38:39
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pinewright

木虫 (初入文坛)
我觉得的话还是取完样品后立刻用缓冲液稀释涂布比较好吧，保存的话菌的数量或多或少都会有变化的吧？
要想精确地定量可以考虑定量pcr~
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原来你也唱过我的歌，陪同见证年月的经过
6楼2011-06-20 11:06:09
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uzzshadow

银虫 (初入文坛)
送鲜花一朵
谢谢，我现在厌氧菌和好氧菌都要做，主要是样品多，工作量大，一次性做不完，要分批次做
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8楼2011-06-21 20:17:26
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uzzshadow

银虫 (初入文坛)
送鲜花一朵
引用回帖:
Originally posted by uzzshadow at 2011-06-19 00:38:39:
谢谢！！

谢谢！
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9楼2011-06-21 20:32:29
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uzzshadow

银虫 (初入文坛)
送鲜花一朵
引用回帖:
Originally posted by caisanrenju at 2011-06-20 17:01:00:
不知LZ要测哪几种肠道菌，是好氧菌还是厌氧菌？
如果是厌氧菌，建议不要保存，直接计数。
如果是好氧菌，可以保存，但最好不要-20C，保存后的影响较大。我们实验室的保存方法是：取肠道内容物后，用缓冲蛋白胨水 ...

谢谢，我现在厌氧菌和好氧菌都要做，主要是样品多，工作量大，一次性做不完，所以看看能不能有好的保存方法
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10楼2011-06-21 20:35:50
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