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天空的蓝

铜虫 (小有名气)

[求助] 异硫氰酸胍提取DNA 已有4人参与

刚开始做细菌分子实验，请问哪位大神能告诉我异硫氰酸胍与DNA、RNA的作用机理吗？它作为提取DNA的药剂有什么好坏呢？实在不懂，希望不吝赐教，谢谢~~~~
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1楼 2015-01-24 16:21:16
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红卫大兵

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
天空的蓝(西门吹雪170代发): 金币+3, 鼓励热心回帖交流 2015-01-24 20:46:48
1.异硫氰酸胍消化液

异硫氰酸胍4mol/L

柠檬酸钠(PH7.0)25mmol/L

十二烷基肌酸钠0.5%

β-巯基乙醇0.1mol/L

2.消化方法：用50～100ul细胞悬液及血清，加等体积的异硫氰酸胍消化液振混匀后，或65℃1小时，或室温放置数分钟，然后加1/10体积的3mmol/LpH5.2的醋酸钠缓冲液，再加等体积的酚：氯仿，用力振摇约10s，10000r/min，离心5min，取上清加等体积异丙醇-20℃放置3h后，14000r/min离心15min，沉定用75%冰冷乙醇离心洗涤1～2次，真空干燥，沉淀用TE缓冲液溶解即可用于逆转录PCR扩增，或放-20℃保存。
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2楼2015-01-24 18:44:59
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碧雪凡

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

异硫氰酸胍是强蛋白变性剂，对于RNA而言，高浓度胍盐和其他试剂合用能够快速抑制RNA酶活性，避免RNA被降解。
还有如果你是用柱子提取，现在的硅胶膜都会提到一定浓度的胍盐能够使得DNA被硅胶膜吸附，因此除去杂质。
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3楼2015-08-21 13:18:27
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mew10086

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

异硫氰酸胍-酚法提取RNA的原理：异硫氰酸胍和b-巯基乙醇共同作用抑制RNase的活性，同时异硫氰酸胍和十二烷基肌氨酸钠共同作用是使蛋白质变性，从而释放RNA；在酸性条件下DNA极少发生解离，同蛋白质一起变性被沉淀下来，而RNA溶于上清中。
异硫氰酸胍的毒性：吸入，摄入，皮肤接触异硫氰酸胍均可造成损伤，所以操作时需穿好实验服，戴好手套和护目镜；其与酸接触可释放极高毒性气体，对水生生物有害，可能对水体环境产生长期不良影响，因此应避免释放至环境中。
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4楼2018-08-24 08:54:10
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格林化工

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

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5楼2020-10-09 09:50:50
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格林化工

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

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6楼2020-10-10 12:09:04
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