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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 急求！毕赤酵母诱导表达问题
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aabbwestone

银虫 (初入文坛)

[求助] 急求！毕赤酵母诱导表达问题 已有2人参与

1 未做过密码子优化的基因是否可以用毕赤酵母表达系统
2 甲醇诱导条件是否需要调试？（试过1%3天，2%3天）
3 做的是乳酸菌原核基因在毕赤酵母表达系统中能做出来的可能性
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rightbackinthewater
1楼 2015-01-21 23:50:53
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5就是5丫丫

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

第一个，没有经过密码子优化能不能做，这个不一定，你要看看你的序列稀有密码子含量多不多，
第二个，甲醇浓度还行，蛋白表达时间还是跟你的蛋白大小有些关系的，建议你诱导后3d（这个时间根据你的基因大小决定，大于1kb的基因可以从第3d开始收集）开始收集菌体，以后每隔一天收集一次，持续5-7d，之后检测蛋白含量（有酶活反应的可以直接测酶活）
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4楼2018-07-04 10:43:22
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槑烦恼

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
drwhoknowss: 金币+1, 鼓励交流 2018-07-03 00:49:37
回复第二个问题，甲醇我做的时候，第一天诱导加0.5%，之后每24h加1%
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2楼2018-07-02 15:47:51
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渊博震天

版主 (职业作家)

Yeast Display

优秀版主优秀版主
引用回帖:
2楼: Originally posted by 槑烦恼 at 2018-07-02 15:47:51
回复第二个问题，甲醇我做的时候，第一天诱导加0.5%，之后每24h加1%

你的表型是什么样的？
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3楼2018-07-02 20:09:55
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5就是5丫丫

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

补充一下 ，因为甲醇挥发性比较强，所以每天还有补充一下，我做试验时用的是1%的甲醇诱导的，之后每天还补1%的甲醇
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5楼2018-07-04 10:45:53
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