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原核表达破碎后蛋白在沉淀里，以前都是在上清，是变成包涵体了吗？
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各位大牛： 去年一直跟师姐做蛋白纯化，按师姐的方法：将菌液以1:1000的比例加入到含有50mg/L Kana的LB培养基中，37℃170rpm摇床上过夜培养，次日，取这些初次活化的菌液以1:100的比例在含有Kana的LB培养基中（500ml）进行二次活化，培养2.5-3小时至生长对数中期（OD600=0.5~0.7）加入100μl 0.2mg/L的IPTG（1:5000），室温150rpm继续培养过夜，集菌，加入5ml裂解液混匀，超生破碎3'，停顿10'，250W，振幅60%，9min，之前SDS-PAGE检测蛋白均在上清中，可是最近活化培养的菌再检测都在沉淀里，其他基因的蛋白都在上清，就这一个出问题了，各位大神，我这是哪里出问题了？小妹好zao急的说。。。。。。另附胶图如下：前两个泳道是用别的实验室的破碎仪，后两个泳道是我们实验室的破碎仪，最后的是代别人跑的，可以忽略。。。。。。  |
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3楼2015-09-05 09:20:39
2楼2015-01-19 22:02:40