| 查看: 2522 | 回复: 2 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
[求助]
原核表达破碎后蛋白在沉淀里，以前都是在上清，是变成包涵体了吗？
|
|||
|
各位大牛： 去年一直跟师姐做蛋白纯化，按师姐的方法：将菌液以1:1000的比例加入到含有50mg/L Kana的LB培养基中，37℃170rpm摇床上过夜培养，次日，取这些初次活化的菌液以1:100的比例在含有Kana的LB培养基中（500ml）进行二次活化，培养2.5-3小时至生长对数中期（OD600=0.5~0.7）加入100μl 0.2mg/L的IPTG（1:5000），室温150rpm继续培养过夜，集菌，加入5ml裂解液混匀，超生破碎3'，停顿10'，250W，振幅60%，9min，之前SDS-PAGE检测蛋白均在上清中，可是最近活化培养的菌再检测都在沉淀里，其他基因的蛋白都在上清，就这一个出问题了，各位大神，我这是哪里出问题了？小妹好zao急的说。。。。。。另附胶图如下：前两个泳道是用别的实验室的破碎仪，后两个泳道是我们实验室的破碎仪，最后的是代别人跑的，可以忽略。。。。。。  |
回复此楼» 猜你喜欢
OpenAI又攻克数学难题了，离AI做有机合成还有多远？
已经有7人回复
-
售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急
已经有9人回复
-
售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急
已经有8人回复
-
售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急
已经有10人回复
-
售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急
已经有9人回复
-
售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急
已经有7人回复
-
售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急
已经有10人回复
-
售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急
已经有9人回复
-
售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急
已经有10人回复
-
售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急
已经有7人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 原核表达大家帮忙看我的目的蛋白怎么没有表达出来
已经有6人回复
- HIS标签的上清表达蛋白，为什么混合时产生沉淀？
已经有0人回复
- 目的蛋白表达纯化，求教高手
已经有12人回复
- 绿色荧光蛋白SDS-PAGE电泳条带分析
已经有5人回复
- 原核表达只能在沉淀中检测出目标蛋白怎么办
已经有9人回复
- 原核表达蛋白时标签无论在N端还是C端蛋白折叠时都被折进去了，怎么办
已经有18人回复
- 原核表达 蛋白质全在沉淀里，这是怎么回事啊
已经有12人回复
- 蛋白破碎后，上清的活性很低
已经有24人回复
- pET28a载体蛋白表达为包涵体
已经有5人回复
- 亲们，你们的包涵体蛋白透析会出现沉淀么，郁闷啊，能不能给只个招？？？
已经有5人回复
- 求助！关于GST融合蛋白纯化！楼主愁得一夜没有睡好！
已经有20人回复
- His Tag融合蛋白纯化
已经有8人回复
- 大肠杆菌超声破碎很久不见澄清仍是白色的
已经有21人回复
- 原核表达形成了包涵体怎么办啊？
已经有22人回复
- 【求助/交流】原核表达 诱导时间的长短影不影响蛋白的活性啊？
已经有6人回复
|
本帖内容被屏蔽 |
3楼2015-09-05 09:20:39
2楼2015-01-19 22:02:40
