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静待天享

金虫 (小有名气)

[求助] ELISA相关问题 已有4人参与

做了几次试验，结果都不理想，吸光值很低，都在0.045左右，加入底物之后溶液变成蓝色，加中止液后变成黄色，变成蓝色后颜色是还有一次递增的趋势，加完中止液后黄色都特别接近。求赐教！！！1
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1楼 2015-01-18 09:38:04
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红卫大兵

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
是不是溶液不好使了，或者没混匀啊。
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2楼2015-01-18 10:17:15
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飞约疯人院

专家顾问 (著名写手)

科学怪人

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2015-01-18 15:07:32
静待天享: 金币+10, ★★★很有帮助, 谢谢！ 2015-01-26 15:20:46
1) 显色剂配制后放置时间过长或使用过期显色剂； 2) 加显色剂时溅出孔外造成液体回流。 解决办法： 1) 显色剂尽量在临用前配制，坚持不用过期显色剂，肉眼可见浅蓝色的TMB显色剂不用； 2) 加样时保持显色剂不外流； 3) A、B液应避免接触金属器械。 6 终止 可能原因如加终止液时产生较多气泡，导致假阳性增加。所以在加终止液时应避免产生气泡。 7 读板 如读板时板底不清洁等。应保证酶标板清洁。
所以在整个操作过程中保证酶标板不接触次氯酸; 尽可能实现ELISA检测标准自动化，有效提高检测质量。
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人生贵在行动，迟疑不决时，不妨先迈出小小一步。
3楼2015-01-18 11:17:17
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biotech_zhou

木虫 (著名写手)

待人以诚：专业/专注/专心

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
静待天享: 金币+5, ★有帮助, 谢谢！ 2015-01-26 15:21:07
你是说做的标准曲线吧，本底太高了，拉开的距离较小。
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年末优惠荧光定量pcr、WB、ELISA技术服务一律六折！交流锤炼知识，用心构筑桥梁，以更优质的产品及技术服务助力科研；QQ：2513165427；Email：b
4楼2015-01-22 14:12:14
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静待天享

金虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 飞约疯人院 at 2015-01-18 11:17:17
1) 显色剂配制后放置时间过长或使用过期显色剂； 2) 加显色剂时溅出孔外造成液体回流。 解决办法： 1) 显色剂尽量在临用前配制，坚持不用过期显色剂，肉眼可见浅蓝色的TMB显色剂不用； 2) 加样时保持显色剂不外流； ...

您好！我想问一下在做ELISA实验中，我选择了以前试剂盒中的标准品用，抗体是自己包被的，一抗、二抗都是自己包被的，实验结果是标准品和样品吸光值都没有梯度，都在2.8、2.7、3.0左右。不知道是什么原因？
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5楼2015-01-27 15:11:18
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leslie411013

铜虫 (初入文坛)
请教大神，我的标准品加了冻干保护剂未冻干，常温放置2天对其活性有什么影响么？？？
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分久必合，合久必分，真是至理名言
6楼2016-06-13 17:08:17
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祉子1214

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by 静待天享 at 2015-01-27 15:11:18
您好！我想问一下在做ELISA实验中，我选择了以前试剂盒中的标准品用，抗体是自己包被的，一抗、二抗都是自己包被的，实验结果是标准品和样品吸光值都没有梯度，都在2.8、2.7、3.0左右。不知道是什么原因？...

普遍吸光度值过高，可能的原因有几种：1、洗液配制有误，没加吐温或者吐温浓度过低 2、不知道你是手动洗板还是洗板机洗板，可能是洗板后未拍板干净，二抗残留；3、也有可能包被的抗体浓度计算错误。建议重新配制试剂（或对买的试剂进行检查，包括吐温、显色液等），重视洗板、拍板步骤，再做一次看看
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7楼2016-06-14 16:29:01
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