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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » 有关蛋白功能研究的问题，求助各位
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molizerd

金虫 (正式写手)

[求助] 有关蛋白功能研究的问题，求助各位已有1人参与

坛子里各位大牛好，新虫一只，最近遇见一个问题想寻求大家的帮助。
我目前研究的这个物种是一种真菌，技术限制现在无法进行基因编辑。在本实验室研究的前期，我们鉴定到了此物种的一个重要蛋白。
目前已经做完了原核表达蛋白，并且获得了相应的单抗，获得了亚细胞定位结果，并且证明了他的原核表达蛋白能够粘附在宿主细胞上。现在老板让我着手研究此蛋白的功能，我目前只进行了生物信息学分析了一些磷酸化位点，对于如何制定相对应的功能研究的方法毫无头绪。
求教大家，这种情况无法进行knock out 、knock in的情况应该如何着手研究一个蛋白的功能。
小女子十分感谢各位相助。
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1楼2015-01-11 21:53:40
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molizerd

金虫 (正式写手)
求助求助
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2楼2015-01-11 23:33:56
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titus0805

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
molizerd: 金币+5, ★★★很有帮助 2015-01-12 15:02:52
真菌本身没法做，可以做它的宿主啊。看看黏在宿主细胞上是和哪个表面受体（应该也是蛋白质）结合，结合的机理是什么，这种结合和蛋白的三级结构的关系，结合后对宿主组织及细胞膜的改变，是否靠这种改变侵染宿主，如果把宿主的受体蛋白抑制掉会不会造成真菌的无法侵染。
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3楼2015-01-12 08:12:11
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molizerd

金虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by titus0805 at 2015-01-12 08:12:11
真菌本身没法做，可以做它的宿主啊。看看黏在宿主细胞上是和哪个表面受体（应该也是蛋白质）结合，结合的机理是什么，这种结合和蛋白的三级结构的关系，结合后对宿主组织及细胞膜的改变，是否靠这种改变侵染宿主，如 ...

是个好思路！十分感谢！
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4楼2015-01-12 14:57:34
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molizerd

金虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by titus0805 at 2015-01-12 08:12:11
真菌本身没法做，可以做它的宿主啊。看看黏在宿主细胞上是和哪个表面受体（应该也是蛋白质）结合，结合的机理是什么，这种结合和蛋白的三级结构的关系，结合后对宿主组织及细胞膜的改变，是否靠这种改变侵染宿主，如 ...

看看黏在宿主细胞上是和哪个表面受体（应该也是蛋白质）结合，结合的机理是什么
您好，请问下这一部分工作，是否能够通过Pull down ,co ip 或者western杂交宿主总蛋白这样的方法来抓取这个表面受体蛋白？另外如果此受体不是蛋白，能用什么别的方法再进行抓取嘛？
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5楼2015-01-12 17:00:45
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titus0805

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
molizerd(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-01-14 20:16:23
引用回帖:
5楼: Originally posted by molizerd at 2015-01-12 17:00:45
看看黏在宿主细胞上是和哪个表面受体（应该也是蛋白质）结合，结合的机理是什么
您好，请问下这一部分工作，是否能够通过Pull down ,co ip 或者western杂交宿主总蛋白这样的方法来抓取这个表面受体蛋白？另外如果 ...

可以试试co-ip找找结合蛋白，也应该试试酵母双杂。
如果不是蛋白就比较麻烦了，我想用同位素标记蛋白，然后用电镜看看是不是能看出什么来。不过想想看，不和蛋白结合它和什么结合啊？直接进入细胞膜磷脂分子的话，应该有功能非常明确的domain，并且有3级结构支持才行。
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6楼2015-01-13 10:00:36
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molizerd

金虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by titus0805 at 2015-01-13 10:00:36
可以试试co-ip找找结合蛋白，也应该试试酵母双杂。
如果不是蛋白就比较麻烦了，我想用同位素标记蛋白，然后用电镜看看是不是能看出什么来。不过想想看，不和蛋白结合它和什么结合啊？直接进入细胞膜磷脂分子的话， ...

多谢！

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7楼2015-01-13 11:05:32
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