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非大头061056

新虫 (初入文坛)

[求助] 真菌接种的时候总是不长,并且有杂菌 已有2人参与

帮老板接种真菌,真菌放在冰箱里面4度保存了差不多半年,培养基是BG11固体培养,加抗生素,第一次转接的时候就直接画平板,几乎没有长,第二次直接挑了一块真菌放在培养基上,然后就是真菌没有长,好像死了,长了很多杂菌,晕了。求大神看看啊。。直接上图了。其中两张是待接种的真菌平板,另外两张是接种之后的真菌平板。跪求原因和解决办法。。

真菌接种的时候总是不长,并且有杂菌
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真菌接种的时候总是不长,并且有杂菌-1
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真菌接种的时候总是不长,并且有杂菌-2
PIC_20150105_110458_20A.jpg


真菌接种的时候总是不长,并且有杂菌-3
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puresnowlqin

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
第一块板明显杂菌很多,第二块板的密密麻麻的都是自己的菌么?应该先确认自己的菌落状态。我觉得LZ要选择目标菌株特征性的地方挑菌可能被污染的机会小很多。放了半年也可能死掉了。可以把其中一块板的菌(尽量避开杂菌)用已灭菌的液体培养基(看上面描述菌体有抗性要加抗生素)洗下来,培养后再划线或者稀释涂布,挑选特征性的目标菌落,再进行液体纯培养。我不知道你这一株菌能不能液体生长良好。有的菌固体长不好,但是液体长得好。
最喜欢的就是最好的。
2楼2015-01-05 12:36:48
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puresnowlqin

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

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非大头061056: 金币+100, ★★★很有帮助 2015-01-07 10:31:25
再接着说一些,还是刮下一些菌液体培养试试吧,万一都不长,整块板就没有了。。。如果抗生素不是保持菌体性状必须添加的话,也可以考虑先不加抗生素或者少加一些,然后长了再转到有抗生素的培养基里面。因为菌体保藏太久了,活力不好了。如果后面再有菌株的话一定要保藏冻干管或者甘油管,斜面或者平板保藏不了很久的。
最喜欢的就是最好的。
3楼2015-01-05 13:53:14
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virty76

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
应该是半年冰箱菌已污染,报告老师吧,不要硬做了。
我也遇到过,纯化偶然因素很多,需要通力合作
4楼2015-01-06 14:07:40
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非大头061056

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by puresnowlqin at 2015-01-05 13:53:14
再接着说一些,还是刮下一些菌液体培养试试吧,万一都不长,整块板就没有了。。。如果抗生素不是保持菌体性状必须添加的话,也可以考虑先不加抗生素或者少加一些,然后长了再转到有抗生素的培养基里面。因为菌体保藏 ...

可是每次用接种环刮取真菌时,感觉接种环上的东西几乎没有。然后接种到液体培养基中,感觉在试管里面什么都没有。或者就是在挑去菌丝的时候,会把菌丝都弄到一起,变成黏黏的一小点,菌丝的形态都变了,这样接种到平板或者液体中是否会有问题?(以前学的不是微生物,所以很多小白问题都不懂)求教。。
5楼2015-01-07 10:39:00
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virty76

铁杆木虫 (著名写手)

你可以把接种环变成L型,对于气生菌丝勾取方便些,若怀疑有细菌,不可贴培养基
6楼2015-01-07 14:02:38
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puresnowlqin

金虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by 非大头061056 at 2015-01-07 10:39:00
可是每次用接种环刮取真菌时,感觉接种环上的东西几乎没有。然后接种到液体培养基中,感觉在试管里面什么都没有。或者就是在挑去菌丝的时候,会把菌丝都弄到一起,变成黏黏的一小点,菌丝的形态都变了,这样接种到 ...

接种环挑那么一点点是不行的。菌丝都弄到一起,变成黏黏的一小点,菌丝的形态变了没有关系的,反正要重新长的。还有我们做放线菌或者真菌的很多时候用接种铲的,没有也可以自己找根长的竹签(肯定要长过试管)把钝的那头用刀削出来一个平面,然后小心包起来灭菌(里面纱布外面牛皮纸),接种的时候用那个削好的那头铲取一块(具体根据自己菌体密度和活力定,不容易长的多挑取一些1-2平方cm都行,再多也没有关系,关键要让活化的先长起来,后面活力好了可以少接一点)。用的时候还是要特别注意手不要碰到竹签使用的一端。
最喜欢的就是最好的。
7楼2015-01-08 09:19:45
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非大头061056

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
7楼: Originally posted by puresnowlqin at 2015-01-08 09:19:45
接种环挑那么一点点是不行的。菌丝都弄到一起,变成黏黏的一小点,菌丝的形态变了没有关系的,反正要重新长的。还有我们做放线菌或者真菌的很多时候用接种铲的,没有也可以自己找根长的竹签(肯定要长过试管)把钝 ...

使用接种铲的时候,在挑菌丝的时候,会连着一片琼脂一起挑下来的,这样的话,接种的时候,琼脂和菌丝一起接种到新的平板上,直接覆盖在平板上,我也试过,可是发现并没有生长需要培养的菌丝,而是长了霉菌或者就是菌死掉了,不知道是不是我的操作有问题啊??
8楼2015-01-08 20:02:28
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puresnowlqin

金虫 (小有名气)

引用回帖:
8楼: Originally posted by 非大头061056 at 2015-01-08 20:02:28
使用接种铲的时候,在挑菌丝的时候,会连着一片琼脂一起挑下来的,这样的话,接种的时候,琼脂和菌丝一起接种到新的平板上,直接覆盖在平板上,我也试过,可是发现并没有生长需要培养的菌丝,而是长了霉菌或者就是 ...

你要是铲了一块就好液体培养,长了后再进行平板涂布或者划线分离。
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9楼2015-01-09 08:44:27
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