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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 求助培养四膜虫的问题，多谢，急
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智慧源泉

银虫 (小有名气)

[求助] 求助培养四膜虫的问题，多谢，急

我的实验需要培养四膜虫，之前发过一个帖子，已经解决了问题，也换了药品。
但是现在又遇到新的问题，四膜虫这段时间一直被感染，长出许多杂菌，搞不清楚什么原因，所以使用的用品全部灭菌过，但是试验结束后还是被感染，百思不得其解，做微生物实验太痛苦了，总是不知道怎么回事就会出问题，我养的这些四膜虫特别娇气。。。没事就闹闹脾气，好烦啊。

我做的是四膜虫的毒性实验，微量热方法，目前做的是硝基苯酚和氨基苯酚与金属对其的联合毒性。苯酚类都是溶解在乙二醇二乙醚里，但是奇怪的是，只要一加如苯酚类溶液，第二天四膜虫就会变浑浊，起初以为是感染了，大幅度灭菌了一下，还是这样。
后来我把苯酚类溶液单独加入培养基内，看看是不是和培养基反应，结果没有变浑浊，很正常，只要一加入四膜虫马上变浑浊，难道是何四膜虫反应了？？
再后来我又单独把乙二醇二乙醚加入到四膜虫中，果然变浑浊了，我又试了乙醇和丙酮两种有机溶剂，发现还是会变浑浊，我真是彻底服了。。。也搞不清是什么原因。。。。。到底是怎么回事呢。。。。以前并没有这样过啊。。。。

[ Last edited by zhang8826857 on 2011-12-15 at 13:35 ]
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1楼2011-12-09 13:20:42
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回帖置顶 ( 共有1个 )

智慧源泉

银虫 (小有名气)
引用回帖:
楼: Originally posted by xzx018 at 2011-12-13 13:12:54:
通风是保持正压 这样外界的空气就不会进去了也避免了外界空气中得孢子什么的进去，不过紫外时通风消灭臭氧应该还是有道理的，毕竟臭氧可以引起突变什么的。和上面一个同学想法差不多，先用空的培养基（敞开口的） ...

貌似不是超净台的问题
我做的是硝基酚类对四膜虫的毒性（真没什么好做的，老板非叫做），酚类需要溶解在乙二醇二乙醚中，昨天发现只有不加药品的对照组可以正常生长，那估计就是因为药品和什么发生反应了。今天直接用乙二醇二乙醚加到四膜虫里，居然也变浑浊！乙二醇二乙醚变质了？买了大概一年，放在柜子里保存，貌似味道是没之前那么浓，但是直接加到没有四膜虫的培养基里是不会变浑浊的，难道和四膜虫反应了，求高手应答啊。。。。
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21楼2011-12-14 11:09:59
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普通回帖

cheauyn

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
amisking(金币+3): 鼓励发帖交流。 2011-12-09 20:32:09
超净台由三相电机作鼓风动力，功率１４５～２６０Ｗ左右，将空气通过由特制的微孔泡沫塑料片层叠合组成的“超级滤清器”后吹送出来，形成连续不断的无尘无菌的超净空气层流，即所谓“高效的特殊空气”，它除去了大于０．３μｍ的尘埃、真菌和细菌孢子等等。超净空气的流速为２４～３０ｍ／ｍｉｎ，这已足够防止附近空气可能袭扰而引起的污染，这样的流速也不会妨碍采用酒精灯或本生灯对器械等的灼烧消毒。工作人员就在这样的无菌条件下操作，保持无菌材料在转移接种过程中不受污染。
    超净台进风口在背面或正面的下方，金属网罩内有一普通泡沫塑料片或无纺布，用以阻拦大颗粒尘埃，应常检查、拆洗，如发现泡沫塑料老化，要及时更换。除进风口以外，如有漏气孔隙，应当堵严，如贴胶布，塞棉花，贴胶水纸等。工作台正面的金属网罩内是超级滤清器，超级滤清器也可更换，如因使用年久，尘粒堵塞，风速减小，不能保证无菌操作时，则可换上新的。
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2楼2011-12-09 14:52:06
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gene001

金虫 (正式写手)

就是个普通教师

【答案】应助回帖

★
zhang8826857(金币+1): 有道理 2011-12-09 22:20:50
超净台的空气过滤期是有使用寿命的，还有必须在使用一段时间后拆出来清洗在装回去，不然通入里边的空气很容易带菌的，导致杂菌污染！！！
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大家共同交流、共同提高！！！
3楼2011-12-09 18:08:04
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fxgowen

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
amisking(金币+2): 鼓励发帖交流。 2011-12-09 20:32:15
智慧源泉(金币+5): 2011-12-11 20:03:42
我建议你把超净台消下毒。先用75%的酒精喷，然后紫外照射，当然可能还用残留的真菌，然后用甲醛和高锰酸钾按2:1的比例，先放入高锰酸钾，再放入甲醛，每立方米加甲醛80ml，高锰酸钾40g，配好了放一个大敞口器皿放入超净台中，比较味，灭完之后要等一天再用超净台就没问题啦
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4楼2011-12-09 20:08:14
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wangsongwei

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

建议实验室整体灭菌
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5楼2011-12-09 20:45:53
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樱空释-怀

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

智慧源泉(金币+4): 2011-12-11 20:05:26
智慧源泉(金币+4): 2011-12-11 20:05:27
建议试验台用75%酒精擦拭！你文中写“先开紫外，三十分后通风”，应该是边灭菌边通风，灭菌30 min吧！
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加油！
6楼2011-12-09 20:53:45
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暧醉殇

捐助贵宾 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
zhang8826857(金币+5): good，鼓励新虫 2011-12-09 22:21:01
智慧源泉(金币+5): 2011-12-11 20:07:13
首先超净台的滤网使用的时间是有年限的，经过一段时间的食用滤网是要更换的，但是没有条件的实验室就另当别论了，而且现在大学里的实验室基本上就是能省就省，所以就算要将就也得把滤网清洗干净，然后你用75%的酒精将整个超净台擦拭一遍，如果仍旧不放心可以用双氧水、过氧乙酸等再擦一遍，假如对无菌条件很苛刻的，你不仅要对超净台灭菌，你还要用紫外对你所处的整个环境灭菌，然后在操作之前要把手用75%的酒精擦一遍，再去操作。最后超净台灭菌时要紫外和风一起开的~最后祝你成功！
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7楼2011-12-09 21:39:19
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kissyls

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

最好就是彻底消下毒，要是真的更换过滤网，成本还是蛮高的，最直接就是联系厂家，让厂家上门更换，不过比较贵的。
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我像只鱼儿在你的荷塘,只为和你守候那皎白月光.游过了四季荷花依然香,等你宛在水中央.
8楼2011-12-09 21:40:08
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dasheng1980

铁杆木虫 (知名作家)

大圣

【答案】应助回帖

★
zhang8826857(金币+1): 鼓励交流 2011-12-09 22:21:23
智慧源泉(金币+5): 2011-12-11 20:07:54
智慧源泉(金币+5): 2011-12-11 20:08:51
超净台的空气过滤期是有使用寿命的，另外会因为使用不当或环境不好，又不经常处理，导致它的保护无菌的性能下降；
通风的真正原因是让操作者在无菌的条件下工作，保持持操作环境正压；
先开紫外，三十分后通风，是没问题的，不过日光灯管不能同时开；
把滤器清洁一下，可以做一下验证，确定一下是不是滤器漏了。
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dasheng1980
9楼2011-12-09 21:56:05
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jenny静

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
zhang8826857(金币+3): 鼓励新虫，加油哦 2011-12-10 04:15:54
实验室的卫生也是很重要的，尤其是微生物实验室.......可以考虑实验室整体打扫
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10楼2011-12-09 22:13:32
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