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白芨的根部内生真菌分离 已有3人参与
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各位同仁，这几天我在做白芨根部的内生真菌分离。分了快一个月了，还没分出来。 用的是PDA培养基，消毒时间除了酒精30s外，分别用了0.1%升汞2min、3min。4min、5min。死活啥都不长。 我都快哭了，现在都研二了，做不出还怎么毕业呀。白芨根看起来和生姜差不多。大家给个合适的消毒方法！！！ 不知道是不是升汞把内生真菌杀死了，我又想用10%次氯酸钠10min试下。烦死了。 |
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【答案】应助回帖
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感谢参与，应助指数 +1
slgzht: 金币+10, ★★★很有帮助, 感谢 2013-12-22 10:46:21
laozuzunzhe: 金币+5, good！ 2013-12-23 10:25:07
amisking: 回帖置顶 2014-01-06 18:56:53
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建议有以下几个: 1. 请在你的1000mLPDA的配方中加入KH2PO4 3g; MgSO4 1.5g; 维生素B1: 10mg后再试试。因为PDA配方有两种，一种是综合性的，一种是普通的(主要成分就是马铃薯和葡萄糖)。综合性配方还是我上大学时我的老师教给我们的，比普通配方好。 2. 你在分离过程中的所有的器皿(如镊子、培养皿、烧杯、剪刀、解剖刀、棉球等)全部高压蒸汽灭菌，60摄氏度干燥后放入超净工作台，紫外灯照射杀菌后才能从包扎中取出来用。 3. 你的手在操作前一定要用75%酒精擦遍(关键)。 4. 白芨根部表面消毒时，只用75%酒精擦拭表面，不要浸泡。(消毒方法一) 5. 白芨根部表面消毒时，用75%酒精擦拭表面后，用0.1%升汞棉球擦拭表面，不要浸泡。(消毒方法二) 6. 用于分离的白芨根不能有伤口(关键)，2端的断口用上述消毒剂擦拭后，立即用无菌刀切弃。 消毒方法一和消毒方法二可以对比使用。我做过其它植物内生菌的分离以及多种植物内部组织分离，全部用的这样的方法，都能成功。但是我没有做过白芨根部内生菌的分离，所以我不能确定这方法是否对你有效，但你可以试试。另外，如果你所取的白芨根本身就没有内生菌，那你怎么分离都分不到的，不过这是我的看法，因为我毕竟对白芨这种植物不了解。 另外，对你有一个小的请求，就是: 你能否成功都反馈给我你成功与否的信息，好吗? 希望你能够成功! |
2楼2013-12-22 07:41:52
13楼2015-07-10 09:00:08
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15楼2016-07-04 18:59:26
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【答案】应助回帖
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您昨天做的，如果有真菌的话，真菌从白芨到您配制的培养基因为前后生长环境不同，可能要两三天或更长一些的时间才能看到生长。您除了注意操作方法上既不要污染杂菌，又要保证真菌生长外，您还要考虑您分离的真菌是否有什么特别。您决定从白芨中分离真菌，一定是看到有报道才这么做，而且一定是这真菌有意义您才做。所以建议您一定要查到原始的文献，要把有关白芨内生真菌的英文文献尽量都查到，看前人用的什么培养基、什么培养条件，分离方法是否有什么特别之处等。总之，建议您要吃透英文文献的内容，否则就可能要走很多的弯路。因为我不懂白芨，也不做有关它的工作，我就只能在您等待结果的过程中给您提这样的建议。 |
6楼2013-12-23 23:09:42
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