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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 白芨的根部内生真菌分离
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slgzht

银虫 (小有名气)

[求助] 白芨的根部内生真菌分离已有3人参与

各位同仁，这几天我在做白芨根部的内生真菌分离。分了快一个月了，还没分出来。
用的是PDA培养基，消毒时间除了酒精30s外，分别用了0.1%升汞2min、3min。4min、5min。死活啥都不长。
我都快哭了，现在都研二了，做不出还怎么毕业呀。白芨根看起来和生姜差不多。大家给个合适的消毒方法！！！
不知道是不是升汞把内生真菌杀死了，我又想用10%次氯酸钠10min试下。烦死了。
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为什么我木有红花？
1楼2013-12-21 10:22:43
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slgzht

银虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by xqxqxhxh1 at 2013-12-24 22:36:48
那您就把温度调节到英文文献上的25度，严格按照别人的条件去操作，等到4天以后看能不能长。
还有，您以前在4天以后出现了褐变，说明能长出菌，为什么后来又分离不到了呢? 您可以自己分析一下出现前后差别的原因。

褐变了，但是没长出来菌。四天了，还是没长出来。
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为什么我木有红花？
9楼2013-12-25 16:25:22
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xqxqxhxh1

捐助贵宾 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
slgzht: 金币+10, ★★★很有帮助, 感谢 2013-12-22 10:46:21
laozuzunzhe: 金币+5, good！ 2013-12-23 10:25:07
amisking: 回帖置顶 2014-01-06 18:56:53
建议有以下几个:
1. 请在你的1000mLPDA的配方中加入KH2PO4  3g; MgSO4  1.5g; 维生素B1: 10mg后再试试。因为PDA配方有两种，一种是综合性的，一种是普通的(主要成分就是马铃薯和葡萄糖)。综合性配方还是我上大学时我的老师教给我们的，比普通配方好。
2. 你在分离过程中的所有的器皿(如镊子、培养皿、烧杯、剪刀、解剖刀、棉球等)全部高压蒸汽灭菌，60摄氏度干燥后放入超净工作台，紫外灯照射杀菌后才能从包扎中取出来用。
3. 你的手在操作前一定要用75%酒精擦遍(关键)。
4. 白芨根部表面消毒时，只用75%酒精擦拭表面，不要浸泡。(消毒方法一)
5. 白芨根部表面消毒时，用75%酒精擦拭表面后，用0.1%升汞棉球擦拭表面，不要浸泡。(消毒方法二)
6. 用于分离的白芨根不能有伤口(关键)，2端的断口用上述消毒剂擦拭后，立即用无菌刀切弃。
消毒方法一和消毒方法二可以对比使用。我做过其它植物内生菌的分离以及多种植物内部组织分离，全部用的这样的方法，都能成功。但是我没有做过白芨根部内生菌的分离，所以我不能确定这方法是否对你有效，但你可以试试。另外，如果你所取的白芨根本身就没有内生菌，那你怎么分离都分不到的，不过这是我的看法，因为我毕竟对白芨这种植物不了解。
另外，对你有一个小的请求，就是: 你能否成功都反馈给我你成功与否的信息，好吗?
希望你能够成功!
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自己啥都不懂
2楼2013-12-22 07:41:52
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slgzht

银虫 (小有名气)
laozuzunzhe: 编辑内容 2013-12-23 10:25
引用回帖:
2楼: Originally posted by xqxqxhxh1 at 2013-12-22 07:41:52
建议有以下几个:
1. 请在你的1000mLPDA的配方中加入KH2PO4  3g; MgSO4  1.5g; 维生素B1: 10mg后再试试。因为PDA配方有两种，一种是综合性的，一种是普通的(主要成分就是马铃薯和葡萄糖)。综合性配方还是我上大学时 ...

可以和您交流下吗？

[ Last edited by laozuzunzhe on 2013-12-23 at 10:25 ]
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为什么我木有红花？
3楼2013-12-22 10:46:54
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xqxqxhxh1

捐助贵宾 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by slgzht at 2013-12-22 10:46:54
可以和您交流下吗？
...

可以，我已经将我的所有的经验都写进了给您的回复，您先去做做看能否成功。一般的真菌在一个星期的培养中可以看到是否生长的结果，所以您先赶紧抓紧时间做一下，看能否成功。总之，请您记住一个原则，就是既要表面灭菌彻底，不能污染，也不能将根内部的菌杀死了(0.1%的升汞杀菌力极强，这我们做过实验)。如果这些都做得很好了，只要有内生菌，是肯定分离得到菌的。如果还是分离不到菌，那就是您的白芨的根内部可能没有内生菌了。如果您还有什么问题，尽可以给我留言。不过您先做做吧，光犯愁、着急没有用呀!您说是不是?
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自己啥都不懂
4楼2013-12-23 15:17:54
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