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slgzht

银虫 (小有名气)

[求助] 白芨的根部内生真菌分离 已有3人参与

各位同仁,这几天我在做白芨根部的内生真菌分离。分了快一个月了,还没分出来。
用的是PDA培养基,消毒时间除了酒精30s外,分别用了0.1%升汞2min、3min。4min、5min。死活啥都不长。
我都快哭了,现在都研二了,做不出还怎么毕业呀。白芨根看起来和生姜差不多。大家给个合适的消毒方法!!!
不知道是不是升汞把内生真菌杀死了,我又想用10%次氯酸钠10min试下。烦死了。
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为什么我木有红花?
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tazhongren

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

消毒时间太长了,次氯酸钠3分钟以内,升汞1分半以内就够了,你这个时间都杀死了
16楼2016-07-06 00:13:17
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查看全部 19 个回答

xqxqxhxh1

捐助贵宾 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
slgzht: 金币+10, ★★★很有帮助, 感谢 2013-12-22 10:46:21
laozuzunzhe: 金币+5, good! 2013-12-23 10:25:07
amisking: 回帖置顶 2014-01-06 18:56:53
建议有以下几个:
1. 请在你的1000mLPDA的配方中加入KH2PO4  3g; MgSO4  1.5g; 维生素B1: 10mg后再试试。因为PDA配方有两种,一种是综合性的,一种是普通的(主要成分就是马铃薯和葡萄糖)。综合性配方还是我上大学时我的老师教给我们的,比普通配方好。
2. 你在分离过程中的所有的器皿(如镊子、培养皿、烧杯、剪刀、解剖刀、棉球等)全部高压蒸汽灭菌,60摄氏度干燥后放入超净工作台,紫外灯照射杀菌后才能从包扎中取出来用。
3. 你的手在操作前一定要用75%酒精擦遍(关键)。
4. 白芨根部表面消毒时,只用75%酒精擦拭表面,不要浸泡。(消毒方法一)
5. 白芨根部表面消毒时,用75%酒精擦拭表面后,用0.1%升汞棉球擦拭表面,不要浸泡。(消毒方法二)
6. 用于分离的白芨根不能有伤口(关键),2端的断口用上述消毒剂擦拭后,立即用无菌刀切弃。
消毒方法一和消毒方法二可以对比使用。我做过其它植物内生菌的分离以及多种植物内部组织分离,全部用的这样的方法,都能成功。但是我没有做过白芨根部内生菌的分离,所以我不能确定这方法是否对你有效,但你可以试试。另外,如果你所取的白芨根本身就没有内生菌,那你怎么分离都分不到的,不过这是我的看法,因为我毕竟对白芨这种植物不了解。
另外,对你有一个小的请求,就是: 你能否成功都反馈给我你成功与否的信息,好吗?
希望你能够成功!
自己啥都不懂
2楼2013-12-22 07:41:52
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slgzht

银虫 (小有名气)

laozuzunzhe: 编辑内容 2013-12-23 10:25
引用回帖:
2楼: Originally posted by xqxqxhxh1 at 2013-12-22 07:41:52
建议有以下几个:
1. 请在你的1000mLPDA的配方中加入KH2PO4  3g; MgSO4  1.5g; 维生素B1: 10mg后再试试。因为PDA配方有两种,一种是综合性的,一种是普通的(主要成分就是马铃薯和葡萄糖)。综合性配方还是我上大学时 ...

可以和您交流下吗?

[ Last edited by laozuzunzhe on 2013-12-23 at 10:25 ]
为什么我木有红花?
3楼2013-12-22 10:46:54
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xqxqxhxh1

捐助贵宾 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by slgzht at 2013-12-22 10:46:54
可以和您交流下吗?
...

可以,我已经将我的所有的经验都写进了给您的回复,您先去做做看能否成功。一般的真菌在一个星期的培养中可以看到是否生长的结果,所以您先赶紧抓紧时间做一下,看能否成功。总之,请您记住一个原则,就是既要表面灭菌彻底,不能污染,也不能将根内部的菌杀死了(0.1%的升汞杀菌力极强,这我们做过实验)。如果这些都做得很好了,只要有内生菌,是肯定分离得到菌的。如果还是分离不到菌,那就是您的白芨的根内部可能没有内生菌了。如果您还有什么问题,尽可以给我留言。不过您先做做吧,光犯愁、着急没有用呀!您说是不是?
自己啥都不懂
4楼2013-12-23 15:17:54
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