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chaoliucl

新虫 (初入文坛)

[求助] 求助色谱分离遇到问题 已有3人参与

大家新年好。小弟最近在用制备色谱分离一个有5种混合物的未知样品,准备分离完去做核磁。使用的是C18反向亲水柱,甲醇和水作为流动相,物质极性较大,在各种比例下总是无法得到较好的峰形。随后去做了色质联用,做色质联用的老师在流动相里面添加了5mM/L的甲酸铵,20%甲醇,80%水相结果获得了非常好的出峰。这里面甲酸铵起到了什么作用?
随后我就按照这个添加了甲酸铵的流动相对物质进行了制备。在制备了一半样品后,发现这五种物质中的一种,(旋蒸之前,物质还溶解在流动相中)其颜色发生了变化,再进色谱也不是单峰了。是不是可以判定这个组分与甲酸铵发生了反应?如何去判断是铵反应还是甲酸根反应?
样品量非常少,大概也就是20mg,做的我寝食难安。
有没有其他盐类不影响做核磁,并且能在这种情况下起到类似甲酸铵的效果,让分离很好的出峰?
万分感谢。
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匿名

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3楼2015-01-01 18:33:37
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archbishop

禁虫 (职业作家)

优秀版主

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
1. 液质联用加甲酸铵是为了提高质谱响应,影响了分离效果是因为加了甲酸铵改变了pH。
2. 不知道你的化合物是什么,无法判断是否发生反应以及发生了什么反应。
3. 从细节上找原因
雲幕低垂映桂子,江月留白問柳心。
2楼2015-01-01 18:23:09
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cpuclz

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
我只对你的制备过程给点建议。
首先,建议用水和乙腈做流动相。乙腈的峰型比甲醇好。
如果你的样品对酸稳定,建议在水和乙腈里加0.1%的三氟乙酸。
一般来说,样品不会和甲酸铵反应。是不是旋蒸是温度太高,样品变坏了?
建议低温把有机相旋掉,然后冻干或者萃取。
4楼2015-01-01 22:14:18
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chaoliucl

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by cpuclz at 2015-01-01 22:14:18
我只对你的制备过程给点建议。
首先,建议用水和乙腈做流动相。乙腈的峰型比甲醇好。
如果你的样品对酸稳定,建议在水和乙腈里加0.1%的三氟乙酸。
一般来说,样品不会和甲酸铵反应。是不是旋蒸是温度太高,样品变 ...

非常感谢,明天换乙腈试一试。物质的保留时间比较短,用乙腈洗脱能力更强,会不会更难以保留?
分离出来以后,未经过旋蒸,静置几个小时,溶液就从淡金黄色变为淡绿色。这几种组分都是是耐高温且耐水耐甲醇的,之前试着制备过几次,分的不开,重新旋蒸过,打质谱,量的比例关系没有影响,也没有出新的峰。这次加了甲酸铵后才出现这种现象,应该还是与甲酸铵发生了反应。
5楼2015-01-02 05:26:43
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