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hakkie

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[求助] Real Time PCR 问题

最近做Real-Time,有三个基因,其中一个扩增曲线呈现直线型而非S型(见附件图),扩增完后解链温度73度,而且峰值处的荧光值比其他两个明显低。我觉得是引物二聚体的原因,所以把引物浓度从500nM调到100nM,结果没什么变化,反倒最后扩增产物的荧光值更高了(产物更多)。我想是不是引物自身形成发夹结构导致的??这个引物确实有发夹结构,自身弯曲后有三个互补碱基,不知道这样分析对不对,是否还有其他什么解释??还望高手解答!

Real Time  PCR 问题
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Real Time  PCR 问题-1
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