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ledex

新虫 (初入文坛)

[求助] 7000bp gDNA 片段PCR失败 已有1人参与

模板来源:线虫gDNA
片段长度:6800bp (某启动子加基因)
引物信息:两引物Tm值分别是49.5℃和54℃(符合引物设计原则,无太大问题)
所用酶:Phusion High-Fidelity DNA Polymerase (Thermo Scientific)
本人尝试过十多次均以失败告终。
touch down 尝试过从70℃到55℃,和梯度温度在56℃和62℃之间,最近一次反应体系如下图:
7000bp gDNA 片段PCR失败
本人是新手,恳请诸位大神赐教!
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米粒米米

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

7000bp,延伸190s,时间是不是有点短,40个循环是不是有点多
2楼2015-11-03 16:43:22
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