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新虫 (初入文坛)

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[求助] 7000bp gDNA 片段PCR失败已有1人参与

模板来源：线虫gDNA
片段长度：6800bp （某启动子加基因）
引物信息：两引物Tm值分别是49.5℃和54℃（符合引物设计原则，无太大问题）
所用酶：Phusion High-Fidelity DNA Polymerase (Thermo Scientific)
本人尝试过十多次均以失败告终。
touch down 尝试过从70℃到55℃，和梯度温度在56℃和62℃之间，最近一次反应体系如下图：

7000bp gDNA 片段PCR失败

本人是新手，恳请诸位大神赐教！

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1楼 2014-12-04 16:55:04

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米粒米米

新虫 (初入文坛)

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【答案】应助回帖

7000bp，延伸190s，时间是不是有点短，40个循环是不是有点多

2楼2015-11-03 16:43:22

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