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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 色谱质谱 » HPLC梯度洗脱问题
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海浪016

铜虫 (小有名气)

[求助] HPLC梯度洗脱问题 已有1人参与

我的样品是用梯度洗脱来进行HPLC分析的，梯度洗脱流动相A为磷酸二氢胺缓冲液，流动相B为色谱乙腈。今天在进行分析时，看到流动相B的色谱乙腈快用完了就加了点乙腈，但是在下一阵分析时样品的出峰时间由之前的30min，变为了16min左右，其他什么的都没有动过，请教各位虫友，为什么出峰时间会提前，而且提前了这么多？
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1楼 2014-12-02 17:56:57
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kf1009

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
费姚永芬: 金币+2, 谢谢 交流 2014-12-03 08:59:38
海浪016: 金币+3, ★★★很有帮助 2014-12-03 09:16:02
如果气泡进入泵中，乙腈泵的不稳定，乙腈比例下降，出峰该延后，不应该前移。你把柱子冲洗，从新上流动相稳定试试保留时间和以前是否一致。不知你具体的梯度，有可能是固定相疏水塌陷引起。
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快乐不需要走遍天涯去寻找，只需播一粒种子在脚下。
7楼2014-12-03 08:42:49
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archbishop

禁虫 (职业作家)

优秀版主
可能是因为乙腈太少了，在你加乙腈之前就有气泡进到了管路里。
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雲幕低垂映桂子，江月留白問柳心。
2楼2014-12-02 19:56:53
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海浪016

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by archbishop at 2014-12-02 19:56:53
可能是因为乙腈太少了，在你加乙腈之前就有气泡进到了管路里。

加乙腈之前还是比较多的，液位是漫过流动相的管子的。

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3楼2014-12-02 23:10:23
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archbishop

禁虫 (职业作家)

优秀版主
★ ★ ★
费姚永芬: 金币+3, 辛苦了，谢谢交流 2014-12-03 08:59:27
引用回帖:
3楼: Originally posted by 海浪016 at 2014-12-02 23:10:23
加乙腈之前还是比较多的，液位是漫过流动相的管子的。
...

后面的样品也都提前了吗？
按说不会出现这种情况，我也常这么干，即使是不是同一个牌子的乙腈，不脱气直接倒也不会影响保留时间。

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雲幕低垂映桂子，江月留白問柳心。
4楼2014-12-03 02:18:31
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