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崔永霞

铁虫 (小有名气)

[求助] 知道一个基因的cDNA序列如何获得这个基因的基因组序列呢 已有3人参与

请问大家我知道一个植物基因的cDNA序列，如何设计引物才能获得这个基因的全基因组序列呢？我试着在这个基因的cDNA序列的起始密码子和终止密码子初设计的一对引物，但是没有扩初这个基因的基因组全长序列，请问大家有什么好的方法吗？谢谢啦。
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每个人都有心底最柔软的地方，请不要触碰它，因为每个人都有自己的尊严！
1楼 2014-11-14 05:07:02
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holyala

木虫 (著名写手)

砖家

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
崔永霞: 金币+1, ★有帮助, thank you 2014-11-15 03:30:16
去了解一下5‘ RACE
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3楼2014-11-14 13:38:01
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chenguestc

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2014-11-14 09:14:52
崔永霞: 金币+5, ★★★很有帮助, Thank you 2014-11-15 03:29:51
未扩出，可能是因为你的基因长度太长，或者你设计的引物差，或PCR条件未优化好。
可以依据基因序列设计几对引物，分别扩增，设计引物注意使扩增产物之间有overlap, 然后，拼接。
可以先到NCBI网站进行序列比对，看同源类似基因长度是多少，然后再设计引物的数量。
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2楼2014-11-14 08:29:11
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1761228035

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
RACE。3'和5'添加核酸，然后测序，然后对比，就行了。
RACE(rapid-amplification of cDNA ends)是通过PCR进行cDNA末端快速克隆的技术。
RACE是基于PCR技术基础上由已知的一段cDNA片段，通过往两端延伸扩增从而获得完整的3'端和5'端的方法。
http://baike.baidu.com/view/907114.htm?fr=aladdin
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4楼2014-11-15 11:42:50
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