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hajierlove

铜虫 (正式写手)

[求助] PET28a双酶切,酶切位点之间13bp,可否直接过柱回收 已有5人参与

如题,能不能直接双酶切之后过柱回收,酶切下来的小片段只有13bp
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踏实
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dongdekun

新虫 (初入文坛)

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myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,分子生物期待你更多精彩。 2014-11-03 18:02:24
以前也做过类似的事情,酶切充分的话,没问题。
2楼2014-11-03 12:43:11
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Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖


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myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,分子生物期待你更多精彩。 2014-11-03 18:02:32
少切点质粒,直接过柱就好

[ 发自小木虫客户端 ]
3楼2014-11-03 12:49:31
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hajierlove

铜虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by Neo2000 at 2014-11-03 12:49:31
少切点质粒,直接过柱就好

2ug
左右?

[ 发自小木虫客户端 ]
踏实
4楼2014-11-03 13:32:55
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小冀-

版主 (著名写手)

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【答案】应助回帖


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酶切是得延长点时间,我现在做的那两个酶切位点之间只有11bp,像以前一样酶切过夜,连接之后发现都没有切开,载体自连了,所以我想延长酶切时间试试,看看效果
···
5楼2014-11-03 14:22:38
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hajierlove

铜虫 (正式写手)

引用回帖:
5楼: Originally posted by 小冀- at 2014-11-03 14:22:38
酶切是得延长点时间,我现在做的那两个酶切位点之间只有11bp,像以前一样酶切过夜,连接之后发现都没有切开,载体自连了,所以我想延长酶切时间试试,看看效果

说明书上一个小时就ok了,我用三个小时,Takara的酶应该没问题
踏实
6楼2014-11-03 15:06:45
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埋下一座城

铜虫 (初入文坛)

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myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,分子生物期待你更多精彩。 2014-11-03 18:02:49
不久前刚切过,用的Takara快酶做的,双酶切片段大小21bp,酶切40min,直接过柱回收,木有问题。
7楼2014-11-03 15:18:12
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小冀-

版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

引用回帖:
6楼: Originally posted by hajierlove at 2014-11-03 15:06:45
说明书上一个小时就ok了,我用三个小时,Takara的酶应该没问题...

我们这里一般鉴定酶切3小时,连接时酶切过夜,保险一点···
···
8楼2014-11-03 15:23:04
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hajierlove

铜虫 (正式写手)

引用回帖:
7楼: Originally posted by 埋下一座城 at 2014-11-03 15:18:12
不久前刚切过,用的Takara快酶做的,双酶切片段大小21bp,酶切40min,直接过柱回收,木有问题。

谢谢亲,我胶回收做了一周,十几次,浓度都很低,连上的T7菌液pcr,有目的条带,但是测序不正确,焦虑。今天试了试,晚上连一下
踏实
9楼2014-11-03 15:29:23
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hajierlove

铜虫 (正式写手)

引用回帖:
8楼: Originally posted by 小冀- at 2014-11-03 15:23:04
我们这里一般鉴定酶切3小时,连接时酶切过夜,保险一点···...

恩恩,也有的说酶切时间久了不好
踏实
10楼2014-11-03 15:29:42
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