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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » PET28a双酶切，酶切位点之间13bp，可否直接过柱回收
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hajierlove

铜虫 (正式写手)

[求助] PET28a双酶切，酶切位点之间13bp，可否直接过柱回收 已有5人参与

如题，能不能直接双酶切之后过柱回收，酶切下来的小片段只有13bp
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踏实
1楼 2014-11-03 12:19:42
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dongdekun

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
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myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-11-03 18:02:24
以前也做过类似的事情，酶切充分的话，没问题。
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2楼2014-11-03 12:43:11
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Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
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少切点质粒，直接过柱就好

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3楼2014-11-03 12:49:31
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hajierlove

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by Neo2000 at 2014-11-03 12:49:31
少切点质粒，直接过柱就好

2ug
左右？

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踏实
4楼2014-11-03 13:32:55
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小冀-

版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

★
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myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-11-03 18:02:42
酶切是得延长点时间，我现在做的那两个酶切位点之间只有11bp，像以前一样酶切过夜，连接之后发现都没有切开，载体自连了，所以我想延长酶切时间试试，看看效果
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···
5楼2014-11-03 14:22:38
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hajierlove

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 小冀- at 2014-11-03 14:22:38
酶切是得延长点时间，我现在做的那两个酶切位点之间只有11bp，像以前一样酶切过夜，连接之后发现都没有切开，载体自连了，所以我想延长酶切时间试试，看看效果

说明书上一个小时就ok了，我用三个小时，Takara的酶应该没问题
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踏实
6楼2014-11-03 15:06:45
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埋下一座城

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
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myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-11-03 18:02:49
不久前刚切过，用的Takara快酶做的，双酶切片段大小21bp，酶切40min，直接过柱回收，木有问题。
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7楼2014-11-03 15:18:12
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小冀-

版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主
引用回帖:
6楼: Originally posted by hajierlove at 2014-11-03 15:06:45
说明书上一个小时就ok了，我用三个小时，Takara的酶应该没问题...

我们这里一般鉴定酶切3小时，连接时酶切过夜，保险一点···
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···
8楼2014-11-03 15:23:04
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hajierlove

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 埋下一座城 at 2014-11-03 15:18:12
不久前刚切过，用的Takara快酶做的，双酶切片段大小21bp，酶切40min，直接过柱回收，木有问题。

谢谢亲，我胶回收做了一周，十几次，浓度都很低，连上的T7菌液pcr，有目的条带，但是测序不正确，焦虑。今天试了试，晚上连一下
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踏实
9楼2014-11-03 15:29:23
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hajierlove

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 小冀- at 2014-11-03 15:23:04
我们这里一般鉴定酶切3小时，连接时酶切过夜，保险一点···...

恩恩，也有的说酶切时间久了不好
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踏实
10楼2014-11-03 15:29:42
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