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汕头大学海洋科学接受调剂
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pqsp1219

新虫 (小有名气)

[求助] 差异蛋白表达,求助! 已有3人参与

我想请教一下,我最近要做二维电泳,寻找差异性蛋白。具体过程是,我用一种药物抑制了细菌的蛋白表达(SDS-PSGE可以看到明显的蛋白条带差异),现在想进一步确定是哪一种蛋白。所以需要做二维电泳,但是,我一直有一个疑问,在寻找差异性蛋白时,是控制菌体量一致,还是蛋白量一致?谢谢
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认真做事
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yuguiyan

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,分子生物期待你更多精彩。 2014-10-29 22:14:08
既然是寻找差异蛋白,当然需要蛋白量差异明显,要不你如何挖点?!

[ 发自小木虫客户端 ]
2楼2014-10-29 21:40:42
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pqsp1219

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by yuguiyan at 2014-10-29 21:40:42
既然是寻找差异蛋白,当然需要蛋白量差异明显,要不你如何挖点?!

这个我知道,我是想问,寻找差异蛋白前,是控制菌体的量还是控制蛋白的量一致
认真做事
3楼2014-10-30 09:55:01
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yuguiyan

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by pqsp1219 at 2014-10-30 09:55:01
这个我知道,我是想问,寻找差异蛋白前,是控制菌体的量还是控制蛋白的量一致...

应该是蛋白量一致,跟WB同理

[ 发自小木虫客户端 ]
4楼2014-10-30 10:18:59
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hongqifei

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
确切来讲,应该是内参蛋白的量一致
何须剑道争锋?千人指,万人封,可问江湖鼎峰,三尺秋水尘不染,天下无双。
5楼2014-10-30 16:28:34
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pqsp1219

新虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by yuguiyan at 2014-10-30 10:18:59
应该是蛋白量一致,跟WB同理
...

但是如果控制蛋白量一致的话,就根本不能够真实的反应出对蛋白的影响啊,因为我不知道具体是对哪一个蛋白抑制,哪一个蛋白促进表达
认真做事
6楼2014-11-01 18:55:03
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pqsp1219

新虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by yuguiyan at 2014-10-30 10:18:59
应该是蛋白量一致,跟WB同理
...

但是如果控制蛋白量一致的话,就根本不能够真实的反应出对蛋白的影响啊,因为我不知道具体是对哪一个蛋白抑制,哪一个蛋白促进表达
认真做事
7楼2014-11-01 18:55:23
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pqsp1219

新虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by hongqifei at 2014-10-30 16:28:34
确切来讲,应该是内参蛋白的量一致

能不能具体的解释下,麻烦多谢。
认真做事
8楼2014-11-01 18:55:50
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yuguiyan

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

引用回帖:
6楼: Originally posted by pqsp1219 at 2014-11-01 18:55:03
但是如果控制蛋白量一致的话,就根本不能够真实的反应出对蛋白的影响啊,因为我不知道具体是对哪一个蛋白抑制,哪一个蛋白促进表达...

骚年,这个也有内参的啊!你应该也挖内参

[ 发自小木虫客户端 ]
9楼2014-11-01 18:59:23
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pqsp1219

新虫 (小有名气)

严谨的Western Blot实验设计中要求有良好的参照体系,这对实验结果分析是非常有用。内参是最容易被忽略的一项。我们知道,要用Western Blot比较不同条件下或者不同组织中,目的蛋白表达量的相对多少,前提条件是等量的细胞上样,才有比较的基础。特别表达量不高时,上样量的差别就很可能影响结果的分析。所以你需要内参。
最主要是控制细胞上扬连。多谢各位了
认真做事
10楼2014-11-02 10:05:20
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