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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 各位用自己设计的引物PCR用的体系都是着么样的呢
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qaz139687

新虫 (小有名气)

[求助] 各位用自己设计的引物PCR用的体系都是着么样的呢 已有3人参与

我的体系是  模板cDNA2ul
                   上引物1ul
                   下引物1ul
                  Mg离子2.5ul
                 dNTP0.5ul
                 taq酶0.3ul
               dh2o17.7ul
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1楼 2014-10-26 10:04:11
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

jackie.z

新虫 (初入文坛)
★
qaz139687(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-10-29 09:03:29
体积没有固定模板的，模板一般用100ng（多或少一点点影响不大），引物1ul的话浓度需要是10nmol，你这里用的酶和dNTP/Mg+都足够了，其它影响不是太大
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7楼2014-10-28 00:17:36
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普通回帖

zhaodahe

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+2, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-10-26 18:08:27
咋没BuFFEr？确定是这样的吗？

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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2楼2014-10-26 16:07:39
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cnzpli

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
2*mix10ul
引物0.5
模板100ng
水补足20

[ 发自小木虫客户端 ]
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3楼2014-10-26 18:52:38
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qaz139687

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by cnzpli at 2014-10-26 18:52:38
2*mix10ul
引物0.5
模板100ng
水补足20

你这是什么看不懂。。之前在一篇文章上看到是CDNA1ul  Mg离子2ul  dNTP1.6ul  上下引物各1ul  Taq酶0.4ul  加水补到20ul   这些差一点的有什么影响吗
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4楼2014-10-27 20:26:51
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cnzpli

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by qaz139687 at 2014-10-27 20:26:51
你这是什么看不懂。。之前在一篇文章上看到是CDNA1ul  Mg离子2ul  dNTP1.6ul  上下引物各1ul  Taq酶0.4ul  加水补到20ul   这些差一点的有什么影响吗...

加多少不是看体积的 不同浓度体积肯定不一样 引物是10nmol cdna是100ng 镁离子和dntp按你说的加

[ 发自小木虫客户端 ]
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5楼2014-10-27 20:56:55
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cnzpli

金虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by cnzpli at 2014-10-27 20:56:55
加多少不是看体积的 不同浓度体积肯定不一样 引物是10nmol cdna是100ng 镁离子和dntp按你说的加
...

mmol 打错了

[ 发自小木虫客户端 ]
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6楼2014-10-27 20:58:07
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qaz139687

新虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by jackie.z at 2014-10-28 00:17:36
体积没有固定模板的，模板一般用100ng（多或少一点点影响不大），引物1ul的话浓度需要是10nmol，你这里用的酶和dNTP/Mg+都足够了，其它影响不是太大

模板100ng着么算的呀  还有引物1ul需要10nmol
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8楼2014-10-28 15:42:51
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流氓一个

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
qaz139687: 金币+1 2014-10-31 12:23:56
20微升体系：
ddH2O 13.5
Buffer 2
dNTP 1
引物1 1
引物2 1
模板 1
酶 0.5
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我有我人生
9楼2014-10-30 15:20:44
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qaz139687

新虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by 流氓一个 at 2014-10-30 15:20:44
20微升体系：
ddH2O 13.5
Buffer 2
dNTP 1
引物1 1
引物2 1
模板 1
酶 0.5

你做的是什么物种的  我之前用这个体系跑了下 发现跑出来的条带非常弱
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10楼2014-10-31 12:25:35
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