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汕头大学海洋科学接受调剂
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qaz139687

新虫 (小有名气)

[求助] 各位用自己设计的引物PCR用的体系都是着么样的呢 已有3人参与

我的体系是  模板cDNA2ul
                   上引物1ul
                   下引物1ul
                  Mg离子2.5ul
                 dNTP0.5ul
                 taq酶0.3ul
               dh2o17.7ul
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jackie.z

新虫 (初入文坛)


qaz139687(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-10-29 09:03:29
体积没有固定模板的,模板一般用100ng(多或少一点点影响不大),引物1ul的话浓度需要是10nmol,你这里用的酶和dNTP/Mg+都足够了,其它影响不是太大
7楼2014-10-28 00:17:36
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普通回帖

zhaodahe

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
myprayer: 金币+2, 赠人玫瑰手有余香,分子生物期待你更多精彩。 2014-10-26 18:08:27
咋没BuFFEr?确定是这样的吗?

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
2楼2014-10-26 16:07:39
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cnzpli

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
2*mix10ul
引物0.5
模板100ng
水补足20

[ 发自小木虫客户端 ]
3楼2014-10-26 18:52:38
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qaz139687

新虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by cnzpli at 2014-10-26 18:52:38
2*mix10ul
引物0.5
模板100ng
水补足20

你这是什么看不懂。。之前在一篇文章上看到是CDNA1ul  Mg离子2ul  dNTP1.6ul  上下引物各1ul  Taq酶0.4ul  加水补到20ul   这些差一点的有什么影响吗
4楼2014-10-27 20:26:51
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cnzpli

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by qaz139687 at 2014-10-27 20:26:51
你这是什么看不懂。。之前在一篇文章上看到是CDNA1ul  Mg离子2ul  dNTP1.6ul  上下引物各1ul  Taq酶0.4ul  加水补到20ul   这些差一点的有什么影响吗...

加多少不是看体积的 不同浓度体积肯定不一样 引物是10nmol cdna是100ng 镁离子和dntp按你说的加

[ 发自小木虫客户端 ]
5楼2014-10-27 20:56:55
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cnzpli

金虫 (正式写手)

引用回帖:
5楼: Originally posted by cnzpli at 2014-10-27 20:56:55
加多少不是看体积的 不同浓度体积肯定不一样 引物是10nmol cdna是100ng 镁离子和dntp按你说的加
...

mmol 打错了

[ 发自小木虫客户端 ]
6楼2014-10-27 20:58:07
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qaz139687

新虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by jackie.z at 2014-10-28 00:17:36
体积没有固定模板的,模板一般用100ng(多或少一点点影响不大),引物1ul的话浓度需要是10nmol,你这里用的酶和dNTP/Mg+都足够了,其它影响不是太大

模板100ng着么算的呀  还有引物1ul需要10nmol
8楼2014-10-28 15:42:51
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流氓一个

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


qaz139687: 金币+1 2014-10-31 12:23:56
20微升体系:
ddH2O 13.5
Buffer 2
dNTP 1
引物1 1
引物2 1
模板 1
酶 0.5
我有我人生
9楼2014-10-30 15:20:44
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qaz139687

新虫 (小有名气)

引用回帖:
9楼: Originally posted by 流氓一个 at 2014-10-30 15:20:44
20微升体系:
ddH2O 13.5
Buffer 2
dNTP 1
引物1 1
引物2 1
模板 1
酶 0.5

你做的是什么物种的  我之前用这个体系跑了下 发现跑出来的条带非常弱
10楼2014-10-31 12:25:35
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