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wmhhc

新虫 (初入文坛)

[求助] 液相杂峰求助 已有3人参与

很老的HPLC,最近一直在洗,终于把基线洗平稳了。但是进样的话还是有问题:
1.用100%甲醇做流动相,进纯异丙醇、纯水都会在2-4分钟产生一系列杂峰,进纯乙腈会产生一个单一的很高的峰。但进甲醇就杂峰会小很多,基本可以忽略。
2.用100%乙腈做就动向,进纯乙腈几乎没有杂峰,但进纯甲醇会有一个很高的杂峰。
3.用50%甲醇和50%乙腈做流动相,进纯甲醇、纯乙腈都会产生一个很高的杂峰,进纯水会有一系列的杂峰。
请问下这种情况,应该怎么检查是哪一部分污染了呢?
还有一个问题是:使用某种单一流动相的时候,柱压很稳,基线很平,但一旦使用两种流动相混合,走1小时,柱压仍会有4-5bar的波动,基线也有较大波动。请问下这是泵的问题吗?还是没有平衡好?

update: 感觉甲醇流动相,进乙腈的峰和乙腈流动相进甲醇的峰,以及50%甲醇50%乙腈流动相进甲醇或者乙腈的峰都是溶剂峰。这样会不会是我进样系统污染,只有异丙醇和水才会洗出杂峰呢?

非常感谢!
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daisyzhangwei

木虫 (职业作家)

不曾来过……

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你的检测波长多少?
人生若只如初见...
2楼2014-10-24 09:51:48
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klicking

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
检测到的都是溶剂峰,混合流动相如果是分两相走基线波动大,建议混合成一相之后,摇匀超声脱气后进样,可消除波动。检测波长建议不低于220nm。其实2-4分钟的杂峰,含量测定只要主峰在5分钟以后出,这些杂峰一般是可以忽略的。
归零
3楼2014-10-24 09:58:13
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wmhhc

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by daisyzhangwei at 2014-10-24 09:51:48
你的检测波长多少?

269nm,检测苯酚的

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
4楼2014-10-25 00:10:44
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wmhhc

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by klicking at 2014-10-24 09:58:13
检测到的都是溶剂峰,混合流动相如果是分两相走基线波动大,建议混合成一相之后,摇匀超声脱气后进样,可消除波动。检测波长建议不低于220nm。其实2-4分钟的杂峰,含量测定只要主峰在5分钟以后出,这些杂峰一般是可 ...

非常感谢您的回答!
主峰正好在3分钟左右,淹没在了杂峰里面T_T

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
5楼2014-10-25 00:12:08
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dongbangwang

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
如果是等度洗脱,建议楼主用乙腈和水的流动相,如果是检测苯酚,楼主选用的波长不是很合理,我估计波长应该选择215nm左右,当然这要楼主产品主峰和杂质的吸收而选定;最好用梯度洗脱,还是用乙腈和谁做流动相,因为乙腈的吸收在190nm,溶剂干扰较小,甲醇的吸收再205nm,溶剂干扰较大,如果是自动进样,污染的可能性较小,如果是手动进样,那就要注意进样阀的污染和进样器的污染。
弟子入则孝,出则弟,谨而信,泛爱众,而亲仁,行有余力,则以学文。
6楼2014-10-25 09:20:30
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wmhhc

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
6楼: Originally posted by dongbangwang at 2014-10-25 09:20:30
如果是等度洗脱,建议楼主用乙腈和水的流动相,如果是检测苯酚,楼主选用的波长不是很合理,我估计波长应该选择215nm左右,当然这要楼主产品主峰和杂质的吸收而选定;最好用梯度洗脱,还是用乙腈和谁做流动相,因为 ...

嗯!非常感谢

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
7楼2014-10-25 14:29:00
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daisyzhangwei

木虫 (职业作家)

不曾来过……

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by wmhhc at 2014-10-25 00:10:44
269nm,检测苯酚的
...

建议你换一个不同厂家的甲醇和乙腈试试
我认为是试剂的品质造成的
这个波长下,甲醇和乙腈应该不会出现有杂峰的现象,应该是里面杂质的干扰
另外可以试试假进样
柱压4-5bar的变化不是太正常,接直通,排除一下是不是系统的问题
人生若只如初见...
8楼2014-10-27 10:34:38
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