应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » 7M urea变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测单链DNA，银染显色求助
51/1返回列表
查看: 4692  |  回复: 4
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

guobingyuan

铁杆木虫 (小有名气)

[求助] 7M urea变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测单链DNA，银染显色求助 已有1人参与

现在用7M尿素变性的15%聚丙烯酰胺凝胶电泳检测碱基数40—50左右的单链DNA，最后用银染法显色，具体过程是先用10%醋酸固定，之后用0.1%硝酸银染色，最后用氢氧化钠甲醛溶液还原。问题是胶的背景很深，在凝胶成像仪上看不清，我又将硝酸银含量降低，染色时间降低，染色后洗涤时间延长，降低还原液浓度，通过延长还原时间使得背景浅且条带深。但几次试验之后发现还原时间延长还会导致背景很深，此外，条带也不明显，为粉红色。之前是粉红色夹杂亮白色，怀疑是上样量过大，现在降低了上样量，大概每个孔的上样量在几纳克至十几纳克，但依然是条带不明显（粉红色或淡淡的粉红色），并且背景也会由于还原时间延长而变得很深。希望大家给我支支招，谢谢了！

7M urea变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测单链DNA，银染显色求助
GBY 01.png


7M urea变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测单链DNA，银染显色求助-1
GBY 06.png
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
黎明之前天最黑
1楼 2014-10-22 21:56:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

aoda123

木虫 (正式写手)
最近我也要做变性PAGE胶来分离单链DNA，以前没有接触过，请教你几个问题，跑胶缓冲液需要TBE是吗，Marker要怎么选择呢,还有loading buffer怎么配呢
赞一下 回复此楼
身体健康，工作顺利
2楼2014-10-24 15:38:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

永远一片天

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

最近也需要跑DNA聚丙烯酰胺凝胶电泳，想问下楼主，DNA聚丙烯酰胺凝胶一般不都是跑蛋白的吗？跑DNA灵敏度真的比琼脂糖的高吗？那DNA聚丙烯酰胺凝胶的设备与蛋白质聚丙烯酰胺的设备是一样的吗？目前实验室没有这套设备，可以借用隔壁跑蛋白的吗？
赞一下 回复此楼
3楼2014-11-17 18:33:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

guobingyuan

铁杆木虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by aoda123 at 2014-10-24 15:38:12
最近我也要做变性PAGE胶来分离单链DNA，以前没有接触过，请教你几个问题，跑胶缓冲液需要TBE是吗，Marker要怎么选择呢,还有loading buffer怎么配呢

缓冲液是1×TBE，可以先配10×，用时稀释。marker应该用单链，但是RNA  marker极易降解，我用的是自己买来的不同长度ssDNA片段混合作为marker。loading buffer我是用的2:1体积比的原液和甘油混合，买来的原液是6×，但怕样品沉不下去所以甘油加的多一些。
赞一下 回复此楼
黎明之前天最黑
4楼2014-11-18 15:50:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

guobingyuan

铁杆木虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 永远一片天 at 2014-11-17 18:33:31
最近也需要跑DNA聚丙烯酰胺凝胶电泳，想问下楼主，DNA聚丙烯酰胺凝胶一般不都是跑蛋白的吗？跑DNA灵敏度真的比琼脂糖的高吗？那DNA聚丙烯酰胺凝胶的设备与蛋白质聚丙烯酰胺的设备是一样的吗？目前实验室没有这套设备 ...

琼脂糖是分离较长链段的DNA，对于较短的DNA应该用PAGE。琼脂糖用的是水平电泳槽，PAGE用的是垂直电泳槽，所以就是用的跑蛋白的电泳槽。要根据你的链段长度选择胶的浓度。可以查看《分子克隆实验指南》
赞一下 回复此楼
黎明之前天最黑
5楼2014-11-18 15:53:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 guobingyuan 的主题更新
51/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 26考研报考西工大材料308分求调剂 +3 weizhong123 2026-03-01 3/150 2026-03-01 21:42 by 公瑾逍遥
[基金申请] 成果系统访问量大，请一小时后再尝试。---NSFC啥时候好哦，已经两天这样了 +3 NSFC2026我来了 2026-02-28 3/150 2026-03-01 21:41 by autumntian
[考研] 274求调剂 +3 cgyzqwn 2026-03-01 6/300 2026-03-01 21:24 by cgyzqwn
[考研] 299求调剂 +3 Y墨明棋妙Y 2026-02-28 5/250 2026-03-01 21:01 by tangxiaotian
[考研] 高分子化学与物理调剂 +6 好好好1233 2026-02-28 12/600 2026-03-01 19:48 by 好好好1233
[考研] 306分材料调剂 +4 chuanzhu川烛 2026-03-01 5/250 2026-03-01 19:48 by 无际的草原
[考研] 化工299分求调剂 一志愿985落榜 +5 嘻嘻(*^ω^*) 2026-03-01 5/250 2026-03-01 19:47 by 无际的草原
[考研] 298求调剂 +6 axyz3 2026-02-28 6/300 2026-03-01 19:00 by 18137688336
[考研] 材料类求调剂 +10 wana_kiko 2026-02-28 11/550 2026-03-01 18:11 by 海嵙Y
[考研] 化工专硕348，一志愿985求调剂 +5 弗格个 2026-02-28 8/400 2026-03-01 17:25 by sunny81
[考研] 321求调剂一志愿东北林业大学材料与化工英二数二 +4 虫虫虫虫虫7 2026-03-01 7/350 2026-03-01 16:52 by caszguilin
[考研] 304求调剂 +6 曼殊2266 2026-02-28 7/350 2026-03-01 15:14 by wjLi2017
[考研] 材料工程274求调剂 +3 Lilithan 2026-03-01 3/150 2026-03-01 14:58 by ms629
[考研] 303求调剂 +4 今夏不夏 2026-03-01 4/200 2026-03-01 14:46 by 嘟嘟小浣熊
[考研] 298求调剂 +9 人间唯你是清欢 2026-02-28 12/600 2026-03-01 14:23 by Ducount.Y
[考研] 材料284求调剂，一志愿郑州大学英一数二专硕 +10 想上岸的土拨鼠 2026-02-28 10/500 2026-03-01 14:12 by yc258
[考研] 317一志愿华南理工电气工程求调剂 +6 Soliloquy_Q 2026-02-28 11/550 2026-03-01 11:14 by 歌liekkas
[考研] 311求调剂 +9 南迦720 2026-02-28 10/500 2026-03-01 10:55 by sunny81
[硕博家园] 博士自荐 +6 科研狗111 2026-02-26 10/500 2026-03-01 10:02 by 科研狗111
[考研] 085600材料工程一志愿中科大总分312求调剂 +8 吃宵夜1 2026-02-28 10/500 2026-02-28 20:27 by L135790
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭