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guobingyuan铁杆木虫 (小有名气)
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7M urea变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测单链DNA，银染显色求助 已有1人参与
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现在用7M尿素变性的15%聚丙烯酰胺凝胶电泳检测碱基数40—50左右的单链DNA，最后用银染法显色，具体过程是先用10%醋酸固定，之后用0.1%硝酸银染色，最后用氢氧化钠甲醛溶液还原。问题是胶的背景很深，在凝胶成像仪上看不清，我又将硝酸银含量降低，染色时间降低，染色后洗涤时间延长，降低还原液浓度，通过延长还原时间使得背景浅且条带深。但几次试验之后发现还原时间延长还会导致背景很深，此外，条带也不明显，为粉红色。之前是粉红色夹杂亮白色，怀疑是上样量过大，现在降低了上样量，大概每个孔的上样量在几纳克至十几纳克，但依然是条带不明显（粉红色或淡淡的粉红色），并且背景也会由于还原时间延长而变得很深。希望大家给我支支招，谢谢了！ GBY 01.png  GBY 06.png |
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