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病毒全基因组测序问题。。求大牛~~~ 已有4人参与
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本人想对某一病毒进行基因组测序，已经过细胞培养分离病毒并鉴定，现在准备送测序。问题： 1.怎么把病毒的DNA从细胞培养液提取出来，采用常规的DNA提取试剂盒？ 2.采用常规的dna提取试剂盒，这样的话是不是也把宿主（培养用的细胞）的DNA也提取出来，有什么方法可以减低宿主的污染？ 3.提取出来的dna怎么鉴定纯度，以达高通量测序要求。 万分感谢！！！！ |
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2楼2014-10-22 08:26:49
soarrow
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【答案】应助回帖
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福建生猪(西门吹雪170代发): 金币+3, 鼓励回帖交流 2014-10-24 21:07:11
福建生猪(西门吹雪170代发): 金币+3, 鼓励回帖交流 2014-10-24 21:07:11
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Nanodrop和Qubit这类只能测定浓度，不能鉴定纯度以及核酸大小的分布。所以最好是使用Bioanalyzer 2100和High sensitivity DNA Kit来进行芯片电泳分析。如果实在没有这个仪器，你还可以用测量浓度和毛细管电泳仪，比如QIAxel这里仪器--可以看看提取核酸的大小以及浓度分布状况。 我们做的主要RNA病毒，所以使用QIAGEN RNeasy Plus这个试剂盒，里面带了一个可以去除宿主 gDNA 的柱子。这个试剂盒我们已经用了2年，陆陆续续做了几十张片子吧，效果还行。 DNA病毒的话，可以使用5楼提到的，这个是简介 The PureLink® Viral RNA/DNA Mini Kit provides a rapid and efficient method to simultaneously purify viral RNA/DNA from fresh or frozen cell-free biological fluids (plasma, serum, cerebrospinal fluid) and cell culture supernatants. 链接：http://www.lifetechnologies.com/ ... ICID=search-product |
8楼2014-10-23 13:14:52
9楼2014-10-29 10:24:39
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