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jkamm

金虫 (正式写手)

[求助] 为何只有二聚体 已有3人参与

请教:克隆菌液PCR检测时,所有样品都只有二聚体、无目的带出现。之前纯化回收的PCR产物检测是有目的条带的。难道连接问题,PMD-19连接的效率那么低吗,25个样全是二聚体啊,晕死了,求帮助!
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happydove

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2014-10-19 18:19:39
TA克隆是很好做的,基本都100%的阳性率。
除非你的片段比较大。
你有没有做阳性对照检测,这样可判断是不是试剂出了问题。
如果没做,建议做一下。和样品同时再做一遍。
2楼2014-10-16 17:20:44
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jkamm

金虫 (正式写手)

750bp,有部份样品总是P不出来,难不成挑斑全是阴性的,运气不好?
3楼2014-10-19 14:22:13
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rodickholm

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

you should add positive control
4楼2014-10-20 14:10:10
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peterrjp

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

可能是试剂问题(比如说感受态细胞或连接试剂盒失效)或者操作不当(比如克隆连接、菌物PCR过程中哪步忘加、加错试剂什么的)。
5楼2014-10-20 15:51:05
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