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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 为何只有二聚体
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jkamm

金虫 (正式写手)

[求助] 为何只有二聚体已有3人参与

请教：克隆菌液PCR检测时，所有样品都只有二聚体、无目的带出现。之前纯化回收的PCR产物检测是有目的条带的。难道连接问题，PMD-19连接的效率那么低吗，25个样全是二聚体啊，晕死了，求帮助！
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1楼2014-10-16 16:09:42
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happydove

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2014-10-19 18:19:39
TA克隆是很好做的，基本都100%的阳性率。
除非你的片段比较大。
你有没有做阳性对照检测，这样可判断是不是试剂出了问题。
如果没做，建议做一下。和样品同时再做一遍。
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2楼2014-10-16 17:20:44
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jkamm

金虫 (正式写手)
750bp,有部份样品总是P不出来，难不成挑斑全是阴性的，运气不好?
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3楼2014-10-19 14:22:13
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rodickholm

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

you should add positive control
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4楼2014-10-20 14:10:10
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peterrjp

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

可能是试剂问题（比如说感受态细胞或连接试剂盒失效）或者操作不当（比如克隆连接、菌物PCR过程中哪步忘加、加错试剂什么的）。
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5楼2014-10-20 15:51:05
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