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镍柱有很多杂蛋白是缓冲液的问题还是什么问题？ 已有6人参与
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可溶性蛋白的纯化 1） 平衡缓冲液：pH7.4的50mM磷酸缓冲液含0.5M NaCl，含20mM咪唑。 2） 洗脱缓冲液：pH7.4的50mM磷酸缓冲液含0.5M NaCl，含500mM咪唑。 3） 取1ml镍琼脂糖凝胶FF或镍NTA琼脂糖凝胶FF预装柱，用10ml平衡缓冲液平衡，然后取破碎上清10ml样品以0.5ml/min上样，然后2ml/管分管收集。 4） 用15ml平衡缓冲液洗去未吸附的样品，流速1-2ml/min，2ml/管收集。 5） 用5 ml洗脱缓冲液洗去未吸附的样品，流速1-2ml/min，2ml/管收集。 6） 再用5ml平衡缓冲液平衡柱子，灌满20%乙醇，封闭。 这些是我实验用到的，可以镍柱纯化效果还是不理想，杂蛋白，怎么办？ |
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