24小时热门版块排行榜    

查看: 1058  |  回复: 2

wardwaads

银虫 (小有名气)

[求助] 请各位虫友帮忙定一下最佳退火温度 已有2人参与

各位虫友,如图是我设计引物后的pcr电泳图,不知道选哪个温度作为退火温度为最好,请各位虫友帮忙选择一下最佳的退火温度!谢谢!~
还想问一下:在62.4和63.8的条带下有隐约可见的条带,这是什么东东?_?

另外说明两点:1.hotstart taq 酶对消除引物二聚体非常管用,我用普通酶做的引物二聚体非常明显,如图用HS Taq后效果很好;
2.网上传说的抑制引物二聚体产生的方法:将上下游引物混合后,在100摄氏度沸水中煮5min,迅速置于冰上瞬时冷却,再加入体系中。我用这个方法试了,结果电泳图上什么都没有。不知道是否是因为沸水中煮将引物一级结构破坏导致无法反应,如果是的话看来经验性的东西不能迷信盲从啊!

请各位虫友帮忙定一下最佳退火温度
Sg2 Primer-designing Test(hotstart taq).jpg
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

陌路行客

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
wardwaads: 金币+2, 有帮助 2014-09-26 08:41:08
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,分子生物期待你更多精彩。 2014-09-26 12:23:03
看你59.8°的时候P的还挺好的,就选60吧,温度高了PCR效率下降,如果太低,不同的样品又容易产生杂带。61.1那个模糊的很像是引物二聚体的,只是奇怪为什么前面两个没有。
人生中的悲剧太多了
2楼2014-09-25 22:08:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

bwangel

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
wardwaads: 金币+1, ★★★很有帮助 2014-09-26 16:16:27
58~60都可以,你的都不错,看看你用的酶的介绍,有没说酶最合适温度
3楼2014-09-26 15:16:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 wardwaads 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[找工作] 售SCI文章,我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 k0dTPqJtl0jt 2026-08-14 4/200 2026-08-15 02:21 by 4wMiSEwB6436
[考博] 售SCI文章,我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +4 k0dTPqJtl0jt 2026-08-14 4/200 2026-08-15 01:40 by 4wMiSEwB6436
[基金申请] 各位道友,我要去昆明玩几天,回来见。 +7 Tide man 2026-08-14 8/400 2026-08-15 01:11 by arzu_hma
[考研] 售SCI文章,我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 7lpolszZVXgi 2026-08-14 5/250 2026-08-15 00:52 by 4wMiSEwB6436
[基金申请] 是这周出结果还是下周出结果? +4 yuleib84 2026-08-11 4/200 2026-08-14 23:05 by lfy8008
[基金申请] 哪位老哥知道今年的国自然具体哪一天放榜? +5 Ldrop2023 2026-08-13 5/250 2026-08-14 18:48 by ssxclkj
[论文投稿] 职称评审,求友友推荐见刊最快的期刊 +5 工厂打螺丝 2026-08-08 5/250 2026-08-14 11:03 by 玖戈弋
[硕博家园] 读博的好处 +4 lnee 2026-08-11 4/200 2026-08-14 10:20 by ahsoarli
[基金申请] filecode +15 documentary 2026-08-10 17/850 2026-08-14 10:08 by kissu88
[硕博家园] 一作与独作在应聘高校教师时区别大吗 +3 mbygzh 2026-08-08 4/200 2026-08-13 19:31 by 龙-樱
[基金申请] 重要来源:本周末出结果 +10 瞬息宇宙 2026-08-12 10/500 2026-08-13 15:46 by likettle
[基金申请] 不应该看fileCode +7 且听虎啸 2026-08-12 9/450 2026-08-13 14:27 by flydreamws
[基金申请] Filecode 又变了,巨变 +3 WH3796 2026-08-12 4/200 2026-08-13 14:13 by 小木虫6752397
[基金申请] 分享一下我之前已中青C的计划书的filecode +4 布布和一二 2026-08-11 5/250 2026-08-13 12:56 by cratir
[基金申请] 综述论文作为代表作会不会影响评审专家的印象分? +11 yufeiwaner 2026-08-09 13/650 2026-08-12 08:17 by yufeiwaner
[基金申请] 帮忙看看fileCode +7 wwncly 2026-08-10 13/650 2026-08-11 19:36 by 冰心玉壶晴
[基金申请] 为什么网上很多人说本周 12号出结果 +6 瞬息宇宙 2026-08-10 7/350 2026-08-11 19:25 by Tide man
[基金申请] 什么时候出结果,有咨询渠道??? +3 Tide man 2026-08-11 3/150 2026-08-11 17:54 by kudofaye
[基金申请] 面上项目filecode邪修 +5 西山十月 2026-08-09 7/350 2026-08-10 07:32 by 仁砚薪传
[基金申请] 关于filecode,很负责任的告诉大家 +6 爱看书的可乐 2026-08-08 7/350 2026-08-08 22:13 by a_niu
信息提示
请填处理意见