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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 请各位虫友帮忙定一下最佳退火温度
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wardwaads

银虫 (小有名气)

[求助] 请各位虫友帮忙定一下最佳退火温度 已有2人参与

各位虫友，如图是我设计引物后的pcr电泳图，不知道选哪个温度作为退火温度为最好，请各位虫友帮忙选择一下最佳的退火温度！谢谢！～
还想问一下：在62.4和63.8的条带下有隐约可见的条带，这是什么东东？_？

另外说明两点：1.hotstart taq 酶对消除引物二聚体非常管用，我用普通酶做的引物二聚体非常明显，如图用HS Taq后效果很好；
2.网上传说的抑制引物二聚体产生的方法：将上下游引物混合后，在100摄氏度沸水中煮5min，迅速置于冰上瞬时冷却，再加入体系中。我用这个方法试了，结果电泳图上什么都没有。不知道是否是因为沸水中煮将引物一级结构破坏导致无法反应，如果是的话看来经验性的东西不能迷信盲从啊！

请各位虫友帮忙定一下最佳退火温度
Sg2 Primer-designing Test(hotstart taq).jpg
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1楼 2014-09-25 21:42:28
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陌路行客

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
wardwaads: 金币+2, ★有帮助 2014-09-26 08:41:08
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-09-26 12:23:03
看你59.8°的时候P的还挺好的，就选60吧，温度高了PCR效率下降，如果太低，不同的样品又容易产生杂带。61.1那个模糊的很像是引物二聚体的，只是奇怪为什么前面两个没有。
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人生中的悲剧太多了
2楼2014-09-25 22:08:49
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bwangel

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
wardwaads: 金币+1, ★★★很有帮助 2014-09-26 16:16:27
58~60都可以，你的都不错，看看你用的酶的介绍，有没说酶最合适温度
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3楼2014-09-26 15:16:14
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