应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 3端RACE换了两次引物了，扩出来的都是同一种病毒，求高手给指点一下，不胜感激！
51/1返回列表
查看: 1861  |  回复: 10
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

青青草allan

银虫 (小有名气)

[求助] 3端RACE换了两次引物了，扩出来的都是同一种病毒，求高手给指点一下，不胜感激！

最近做一个基因的全长，3端RACE扩出来的条带经切胶回收，克隆后测序，Blast相似度高的是一种病毒，换了两次引物了，都是同一种病毒，这个病毒是我们研究的这个昆虫体内的一种特有病毒。这种结果，应该是引物不好，特异性扩增了，但我不解的是：为什么两次不同的引物恰好扩的都是这个病毒？难道是这个病毒的基因整合到昆虫体内了？求高手给指点一下，不胜感激！迷茫了，做了好久的RACE，快失去信心了！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
爱出者爱返，福往者福来
1楼 2014-08-30 10:50:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

青青草allan

银虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by gastrodia at 2014-08-31 10:38:19
你自己的特意性引物，在外侧引物里面再设计一条，通用引物用他的，将第一次PCR的结果稀释100倍取1微升作为模版使用内侧引物（最好和外侧引物间隔200bp左右，跑胶的时候好检测）和通用引物（Smart RACE里面有一条短的 ...

意思是第一次PCR时所用的特异性引物（自己根据已做出来的片段设计的3‘或5‘RACE引物）算是外侧引物，第二次PCR时需要设计一条和外侧引物间隔200bp左右的内侧引物？这个内侧引物设计原则是和外侧引物一样的吧？你QQ多少？能否加下好友？
赞一下 回复此楼
爱出者爱返，福往者福来
7楼2014-08-31 10:57:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 11 个回答

喜气洋洋

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
青青草allan: 金币+2, ★有帮助 2014-08-31 10:23:04
是昆虫杆状病毒吗？

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
学海无涯懂做舟
2楼2014-08-30 20:58:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gastrodia

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
青青草allan: 金币+5, ★★★很有帮助 2014-08-31 10:21:45
做RACE的时候建议做巢式PCR来增强特异性
赞一下 回复此楼
3楼2014-08-30 23:07:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

青青草allan

银虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by gastrodia at 2014-08-30 23:07:43
做RACE的时候建议做巢式PCR来增强特异性

你用的也是clontech的试剂盒吗？做巢时PCR的时候，除了用试剂盒里提供的Nested Universal Primer A之外，自己还要设一条引物吗？还是用首次PCR所用的3‘或5‘RACE引物就行？
赞一下 回复此楼
爱出者爱返，福往者福来
4楼2014-08-31 10:21:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 11 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[博后之家] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +4 Aj1rhIDL5ixY 2026-09-14 4/200 2026-09-16 22:16 by Tql5LQhh5rLK
[公派出国] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 40ms4Wlo4umh 2026-09-14 3/150 2026-09-16 21:26 by MHf40yA0Uhyb
[博后之家] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 s3fFTmArrBt6 2026-09-14 7/350 2026-09-16 19:27 by rRvxEj3zorCy
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 s3fFTmArrBt6 2026-09-13 3/150 2026-09-16 18:39 by rRvxEj3zorCy
[考研] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +7 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 8/400 2026-09-16 18:37 by rRvxEj3zorCy
[博后之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +4 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 4/200 2026-09-16 17:03 by i3KBRD19ERkG
[找工作] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +7 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 7/350 2026-09-16 15:12 by i3KBRD19ERkG
[考博] 上海工程技术大学激光智能制造课题组招收博士研究生 +8 两三岁ss 2026-09-14 8/400 2026-09-16 09:46 by 水士口
[博后之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 vZfe6xYu34yj 2026-09-14 3/150 2026-09-16 08:51 by SjQobnC04j06
[考研] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 5/250 2026-09-16 05:03 by LH5NkK5Ud4bh
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +5 s3fFTmArrBt6 2026-09-13 7/350 2026-09-16 03:26 by DgNGHc3h5tPl
[找工作] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 3/150 2026-09-16 02:38 by DgNGHc3h5tPl
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +7 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 8/400 2026-09-16 02:23 by DgNGHc3h5tPl
[博后之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 Aj1rhIDL5ixY 2026-09-14 3/150 2026-09-15 20:26 by zNcEhTcH7ihq
[考研] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +6 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 7/350 2026-09-15 14:22 by VMDqgnlKimtZ
[公派出国] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 3/150 2026-09-15 08:58 by C79jjtjAKjEn
[教师之家] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 3/150 2026-09-15 08:14 by C79jjtjAKjEn
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +4 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 4/200 2026-09-15 07:50 by C79jjtjAKjEn
[教师之家] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 LwdutQ8HoqWP 2026-09-13 4/200 2026-09-14 16:13 by Aj1rhIDL5ixY
[考博] 27秋季材料博士申请求助 10+3 Cahal1 2026-09-11 4/200 2026-09-14 08:50 by 北京莱茵编辑
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭