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IMichaelhan

木虫 (小有名气)

[交流] DNA提取后电泳图答疑 已有4人参与

这是我提取完DNA后做的电泳检测,不明白最上面的那条带是什么意思,提的是基因组总DNA,大小在23k左右,检测完也有总DNA,但是就是在最上面出现了一条很亮有点像引物二聚体的条带,问了师兄都说没见过这是什么情况,我是隔夜裂解的,我还特意加了蛋白酶和RNA酶(怕被污染),最后提出来的浓度很高,用分光光度计检测后最高有5000ng/ml,260/280的比值也在1.9左右,所有的数值可以说都很完美。但是跑完电泳后,就出现了这种情况,求大神解答!

DNA提取后电泳图答疑
2014822dna.jpg
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IMichaelhan

木虫 (小有名气)

最上面的条带是RNA吗,但是我确定我裂解时加过RNA酶,还有DNA降解严重吗,我是用于做PCR模板的,由于我要扩的片段大约有10K左右,这样的DNA模板能用吗?
2楼2014-08-23 18:30:44
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yuxiangdan

木虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
你确定RNase是把RNA一个碱基一个碱基地切下来吗?

[ 发自小木虫客户端 ]
成功者永不放弃,放弃者永不成功。
3楼2014-08-24 01:43:46
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IMichaelhan

木虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by yuxiangdan at 2014-08-24 01:43:46
你确定RNase是把RNA一个碱基一个碱基地切下来吗?

什么意思
4楼2014-08-24 19:05:23
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简牧风爱

新虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
个人觉得最可能是RNA,你检查一下吧
5楼2014-08-24 22:45:13
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yuxiangdan

木虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
4楼: Originally posted by IMichaelhan at 2014-08-24 19:05:23
什么意思...

查查RNase的作用原理!!!

[ 发自小木虫客户端 ]
成功者永不放弃,放弃者永不成功。
6楼2014-08-25 02:14:25
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johnkm66

新虫 (初入文坛)


★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-08-26 22:24:31
引用回帖:
2楼: Originally posted by IMichaelhan at 2014-08-23 18:30:44
最上面的条带是RNA吗,但是我确定我裂解时加过RNA酶,还有DNA降解严重吗,我是用于做PCR模板的,由于我要扩的片段大约有10K左右,这样的DNA模板能用吗?

基本可以确认上面的条带是RNA。原因可能是您用的RNsae有问题。另外,DNA的降解确实比较厉害。市面上已经能够有不用添加Rnase的基因组DNA提取试剂盒,完全可以试试。
7楼2014-08-26 12:06:34
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小步顶

新虫 (初入文坛)

★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2014-09-30 22:10:11
应该是RNA,建议可以再挑取其中一个再加一点Rnase  37℃处理一下,然后跑个电泳鉴定一下就行了。
我个人觉得是RNA
8楼2014-09-16 10:31:28
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