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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » 微生物gDNA琼脂糖凝胶电泳，问题
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WSXP1104

新虫 (小有名气)

[求助] 微生物gDNA琼脂糖凝胶电泳，问题 已有3人参与

琼脂糖凝胶电泳结果，如附件：
问题：1、样品1出现这中情况，有没有可能是上样量太大？
           2、样品2无条带？
            3、胶出现一半白一半稍黑的现象，是因为制胶时胶槽没有放平？

先谢谢了。

微生物gDNA琼脂糖凝胶电泳，问题
1.PNG
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1楼 2014-08-20 20:51:31
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gyesang

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【答案】应助回帖

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WSXP1104(西门吹雪170代发): 金币+4, 鼓励回帖交流 2014-08-21 15:34:23
WSXP1104: 金币+2, ★有帮助 2014-08-21 15:40:15
1. 从你的胶来看，你的胶没有充分凝固好，胶倒完要凝固至少30min，样品1中提取的DNA质量还算可以，一半基因组DNA分子量都比较大，所以会集中在胶的上部，减少上样量，胶可能跑的会更好看
2. 泳道2的确是没有提出DNA，可能是在提取过程中DNA降解了
3. 胶一半白一半黑，我猜你用的是EB染料，EB带正电，电泳时会向正极移动，所以下面的EB往上跑了就会显得不亮，如果你用的是其他染料，如果染料带电的话，也会出现这种情况
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学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
7楼2014-08-21 12:30:06
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gyesang

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【答案】应助回帖

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WSXP1104: 金币+5, ★★★很有帮助 2014-08-21 17:19:22
引用回帖:
8楼: Originally posted by WSXP1104 at 2014-08-21 15:18:16
1,胶凝固30min. 我看过你发的帖子，说胶要薄，这个薄是不超过哦5mm吗？

2、gDNA在23kb左右。上样量：5ul样品+1ul Loading Buffer。样品1微生物数量E+9,样品量2微生物数量在E+2~E+3，洗脱的时候，样品1用了100ul ...

1. 胶的厚薄根据你的梳子调整，薄胶大概1/3梳齿深，也即梳子的齿1/3插在胶中

2. 样品1，提的还好，gDNA可用，样品2没有提到DNA或者DNA降解

3. 泳道1，不一定是降解，小片段DNA的产生也可能是你在提取过程的机械损伤，这个是避免不了的，样品2前端是降解中的RNA，不是漂样

4. 胶要煮透，然后胶要充分凝固，减少上样量(Marker也是)

5. http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=3771137  8楼前西瓜版主的回答
"和EB一样，GoldView电泳时会向负极移动（胶孔方向），所以电泳之后，靠近胶孔那边的背景会更亮，而另一半的胶背景会比较暗，这个是正常现象，不影响结果的。"
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学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
10楼2014-08-21 16:00:49
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