应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 转基因PCR检测，为啥有些带亮，有些不亮？
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
91/1返回列表
查看: 1269  |  回复: 8
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

yangyang1991

主管区长

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！

[求助] 转基因PCR检测，为啥有些带亮，有些不亮？ 已有4人参与

之前加正反引物0.4没有后来加1的亮。是不是因为引物量少的原因？还是其他什么？
又或者是模板的原因？

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

核酸生物学实验经验

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2014-08-06 07:32:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yangyang1991

超级版主

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！
求助！
回复此楼
2楼2014-08-06 08:19:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

songzuowei

管理员

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
yangyang1991(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-08-06 09:28:31
yangyang1991: 金币+1, ★有帮助 2014-08-06 14:36:07
引物加少的话确实影响条带的亮度 这个我做过实验
赞一下 回复此楼
3楼2014-08-06 08:42:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

peak-chen

超级版主

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
yangyang1991: 金币+1, ★有帮助, 用的就是20ul的体系，之前加0.4，这次加0.8，条带比之前亮，并且多出现几条带，但是很不明显！想问下，如何改进。。。 2014-08-06 14:41:12
20ul体系，，，上下游引物在0.8-1ul...可以混合管，，一起加，，，比较不会因为误差
赞一下 回复此楼
4楼2014-08-06 09:53:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wszl666

兑换贵宾

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
yangyang1991: 金币+2, ★★★很有帮助, 用的就是20ul的体系，之前加0.4，这次加0.8，条带比之前亮，并且多出现几条带，但是很不明显！想问下，如何改进。。。 2014-08-06 14:41:30
用基因组做PCR本身就有这个问题，另外转基因的拷贝数也会有影响
赞一下(1人) 回复此楼
基因敲除
5楼2014-08-06 10:45:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

happydove

实习版主

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-08-06 16:24:27
yangyang1991: 金币+2, ★★★很有帮助 2014-08-06 22:49:57
首先不太清楚你扩增的是否为外源基因，如果是，有一个原因可以解释。
拷贝数越高的，扩增的是不是会很亮呢。
你说的引物浓度问题，是同一批引物扩增同一个模板吗？
赞一下 回复此楼
6楼2014-08-06 16:04:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yangyang1991

专家顾问

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！
引用回帖:
6楼: Originally posted by happydove at 2014-08-06 16:04:11
首先不太清楚你扩增的是否为外源基因，如果是，有一个原因可以解释。
拷贝数越高的，扩增的是不是会很亮呢。
你说的引物浓度问题，是同一批引物扩增同一个模板吗？

我今天试了下，增加循环次数，扩增的亮度没有改变。是同一批引物扩增同一个模板，扩增的是之前转入的过表达的基因。很纠结，一直检测的数量不够，没法往下做。。。
赞一下(1人) 回复此楼
7楼2014-08-06 22:49:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

happydove

专家顾问

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！
引用回帖:
7楼: Originally posted by yangyang1991 at 2014-08-06 22:49:48
我今天试了下，增加循环次数，扩增的亮度没有改变。是同一批引物扩增同一个模板，扩增的是之前转入的过表达的基因。很纠结，一直检测的数量不够，没法往下做。。。...

不清楚你扩增的目的是什么，模板是植物还是动物？“一直检测的数量不够”是什么意思？
循环数40个也最高了，你扩增多长，用的什么酶、延伸时间等问题考虑过吗？
引物好用吗  可否多设计几对比较一下
赞一下 回复此楼
8楼2014-08-07 15:04:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yangyang1991

管理员

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！
引用回帖:
8楼: Originally posted by happydove at 2014-08-07 15:04:44
不清楚你扩增的目的是什么，模板是植物还是动物？“一直检测的数量不够”是什么意思？
循环数40个也最高了，你扩增多长，用的什么酶、延伸时间等问题考虑过吗？
引物好用吗  可否多设计几对比较一下...

非常感谢您这么热心的帮我。

扩增的目的是为了检测转基因阳性，模板是植物的。其他问题都考虑过了，之前的师兄师姐都做过一年。

从这些方面我再试试吧。。。实在不行就用这几个去做剩下的试验。。
赞一下 回复此楼
9楼2014-08-07 17:12:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 yangyang1991 的主题更新
91/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[电化学] 070300化学调剂 +7 山顶见α 2026-03-25 7/350 2026-03-31 22:21 by piaoyi415
[考研] 267求调剂 +9 uiybh 2026-03-31 9/450 2026-03-31 22:15 by 天倌赐福
[考研] 一志愿华东理工大学，080500学硕，317分，求调剂 +9 s1145 2026-03-31 9/450 2026-03-31 18:47 by JourneyLucky
[考研] 336材料求调剂 +10 陈滢莹 2026-03-26 12/600 2026-03-31 17:59 by jp9609
[考研] 285求调剂 +3 FZAC123 2026-03-30 3/150 2026-03-31 17:49 by 热情沙漠
[考研] 考研生物与医药调剂 +6 铁憨憨123425 2026-03-31 6/300 2026-03-31 17:48 by 544594351
[考研] 085600 材料与化工 329分求调剂 +20 Mr. Z 2026-03-25 21/1050 2026-03-31 16:53 by Zzxxxs
[考研] 材料求调剂 一志愿哈工大总分298分，前三科223分 +11 dongfang59 2026-03-27 11/550 2026-03-31 16:51 by Wang200018
[考研] 一志愿哈尔滨工业大学材料与化工方向336分 +13 辰沐5211314 2026-03-26 13/650 2026-03-31 14:37 by 记事本2026
[考研] 英一数一总分334求调剂 +4 陈阳坤 2026-03-31 4/200 2026-03-31 14:22 by 记事本2026
[有机交流] 甲基亚磺磺酸钠和甲基磺酸酯反应机理 10+3 kaobao456 2026-03-29 4/200 2026-03-30 23:16 by nBu锂
[考研] 297 地理学070500 复试求调剂 +3 小圆圈圈ooo 2026-03-30 3/150 2026-03-30 21:05 by 余震yz
[考研] 317分 一志愿南理工材料工程 本科湖工大 求调剂 +12 芋泥小铃铛 2026-03-28 12/600 2026-03-30 17:06 by wangjy2002
[考研] 298求调剂 +3 什么是胖头鱼 2026-03-30 5/250 2026-03-30 14:41 by 青海小西牛
[考研] 291求调剂 +5 Y-cap 2026-03-29 6/300 2026-03-29 13:18 by mumin1990
[考研] 332求92调剂 +8 蕉蕉123 2026-03-28 8/400 2026-03-29 10:46 by 周梓丹
[考研] 0703化学求调剂，各位老师看看我！！！ +5 祁祺祺 2026-03-25 5/250 2026-03-27 21:44 by 东方猪猪
[考研] 265求调剂11408 +3 刘小鹿lu 2026-03-27 3/150 2026-03-27 20:53 by nihaoar
[考研] 272求调剂 +7 脚滑的守法公民 2026-03-27 7/350 2026-03-27 17:23 by laoshidan
[考研] 315调剂 +4 0860求调剂 2026-03-26 5/250 2026-03-27 11:23 by wangjy2002
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭