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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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yangyang1991

超级版主

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!

[求助] 转基因PCR检测,为啥有些带亮,有些不亮? 已有4人参与

之前加正反引物0.4没有后来加1的亮。是不是因为引物量少的原因?还是其他什么?
又或者是模板的原因?

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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happydove

主管区长

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2014-08-06 16:24:27
yangyang1991: 金币+2, ★★★很有帮助 2014-08-06 22:49:57
首先不太清楚你扩增的是否为外源基因,如果是,有一个原因可以解释。
拷贝数越高的,扩增的是不是会很亮呢。
你说的引物浓度问题,是同一批引物扩增同一个模板吗?
6楼2014-08-06 16:04:11
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songzuowei

专家顾问

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
yangyang1991(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-08-06 09:28:31
yangyang1991: 金币+1, 有帮助 2014-08-06 14:36:07
引物加少的话确实影响条带的亮度 这个我做过实验
3楼2014-08-06 08:42:36
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peak-chen

版主

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
yangyang1991: 金币+1, 有帮助, 用的就是20ul的体系,之前加0.4,这次加0.8,条带比之前亮,并且多出现几条带,但是很不明显!想问下,如何改进。。。 2014-08-06 14:41:12
20ul体系,,,上下游引物在0.8-1ul...可以混合管,,一起加,,,比较不会因为误差
4楼2014-08-06 09:53:25
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wszl666

专家顾问

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
yangyang1991: 金币+2, ★★★很有帮助, 用的就是20ul的体系,之前加0.4,这次加0.8,条带比之前亮,并且多出现几条带,但是很不明显!想问下,如何改进。。。 2014-08-06 14:41:30
用基因组做PCR本身就有这个问题,另外转基因的拷贝数也会有影响
基因敲除
5楼2014-08-06 10:45:13
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