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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 综合其他 » 关于蛋白质酶液盐析
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shdkzhe

新虫 (初入文坛)

[求助] 关于蛋白质酶液盐析 已有3人参与

如题，需要对样品粗酶液用硫酸铵进行沉淀，如果在室温下按照一定的饱和度加入硫酸铵，那么静置沉淀也是在室温下吗，还是在4度也可以，另外沉淀的酶复溶后测酶活，需要先透析除盐吗，急，求高手解答，不胜感激。。
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1楼 2014-07-30 22:31:47
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calorimetry

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

盐析沉淀的蛋白质不一定都能够复性，这里有一个重折叠的问题，现在对于蛋白质到底是怎么怎么折叠的理论并没有完全明确化。非要做盐析，应该是0度到4度下做，要复性首先要用透析或者超滤除去盐离子。
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4楼2015-06-01 13:48:29
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luwei13566

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
1.你如果是要纯化酶的话最好放4度静置吧。
2.如果你把沉淀的酶溶解后只是想做个酶活检测的话可以不用透析，总会有点活性的。透析等到杂蛋白分离完再做。
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大家相互帮助哈
2楼2014-07-31 00:46:06
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jiweiweiw

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

1 如果你确定你的目的酶在室温静置长时间不失活的话，室温下静置也可以；如果目的酶的要求存储温度在0-4℃的话，你首先加的硫铵的量应该是0℃的系数（最好稍微多加一丢丢），再放置在4℃环境静置沉淀。
2 复溶后测酶活，不透析测出的酶活只有参考性（一般酶活本身过低，不透析根本测不出酶活），透析后才能被记录，硫铵含量过多会影响酶的催化反应。
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3楼2015-05-14 22:10:12
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