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shdkzhe

新虫 (初入文坛)

[求助] 关于蛋白质酶液盐析 已有3人参与

如题,需要对样品粗酶液用硫酸铵进行沉淀,如果在室温下按照一定的饱和度加入硫酸铵,那么静置沉淀也是在室温下吗,还是在4度也可以,另外沉淀的酶复溶后测酶活,需要先透析除盐吗,急,求高手解答,不胜感激。。
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luwei13566

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
1.你如果是要纯化酶的话最好放4度静置吧。
2.如果你把沉淀的酶溶解后只是想做个酶活检测的话可以不用透析,总会有点活性的。透析等到杂蛋白分离完再做。
大家相互帮助哈
2楼2014-07-31 00:46:06
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jiweiweiw

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

1 如果你确定你的目的酶在室温静置长时间不失活的话,室温下静置也可以;如果目的酶的要求存储温度在0-4℃的话,你首先加的硫铵的量应该是0℃的系数(最好稍微多加一丢丢),再放置在4℃环境静置沉淀。
2 复溶后测酶活,不透析测出的酶活只有参考性(一般酶活本身过低,不透析根本测不出酶活),透析后才能被记录,硫铵含量过多会影响酶的催化反应。
3楼2015-05-14 22:10:12
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calorimetry

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

盐析沉淀的蛋白质不一定都能够复性,这里有一个重折叠的问题,现在对于蛋白质到底是怎么怎么折叠的理论并没有完全明确化。非要做盐析,应该是0度到4度下做,要复性首先要用透析或者超滤除去盐离子。
4楼2015-06-01 13:48:29
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