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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 分类/鉴定 » 16S全长扩不出来条带，V3区可以扩出来
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匿名

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1楼2014-07-27 19:32:14
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liuboeo

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
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theSubtleAir: 金币+2, ★有帮助 2014-08-14 19:30:16
酶都要纯化的，这个可能性应该不大，建议换引物试试
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2楼2014-07-27 19:53:29
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ychen222

铁杆木虫 (正式写手)
不明觉厉
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3楼2014-07-27 20:20:40
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崇石

金虫 (正式写手)
不明觉厉

[ 发自小木虫客户端 ]
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4楼2014-07-27 21:06:47
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duane

至尊木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
theSubtleAir: 金币+2, ★有帮助 2014-08-14 19:30:25
不知道你的全长有多长，有的时候太长了不容易扩增的
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5楼2014-07-29 08:04:29
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匿名

用户注销 (文坛精英)
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6楼2014-07-29 10:15:55
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air042

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
theSubtleAir: 金币+5, ★有帮助 2014-08-14 19:30:36
16s的全长引物各种文献提供的有几个碱基有差异，换引物试试。
优化下PCR体系，或者直接换PCR Mix试试。提DNA的时候也注意点，不要太暴力。还有，扩PCR一定要有阳性对照。
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7楼2014-07-29 10:32:49
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柳无芽

至尊木虫 (著名写手)
看到你专心科研，我终于放心了
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无情未必真豪杰，怜子如何不丈夫
8楼2014-08-08 16:44:00
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lvshilu

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
theSubtleAir: 金币+6, ★有帮助 2014-08-14 19:30:44
酶里面可定有DNA残留，是细菌的genomic DNA，用16s引物会有条带，做个模板水阴性实验就知道条带是否来自样品了；
另外，我不太了解昆虫与细菌的16s引物是否一样，你可以先查下；
如果引物没有问题，就要考察是否提DNA时将DNA打碎了，所以全长扩不到。
希望能有帮助，有问题再交流，祝顺利！
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需要金币
9楼2014-08-09 10:47:27
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匿名

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10楼2014-08-13 13:45:38
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