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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 干扰/敲除 » 载体构建问题
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mochenmi

铜虫 (小有名气)

[求助] 载体构建问题 已有1人参与

背景：我要连一个抗性基因到载体上，先要自己把启动子、抗性基因的ORF、终止子连接起来，然后再构到载体上去。抗性基因的ORF是ATG起始，TGA终止的。
现在有个问题是，启动子后面接的ORF应该是ATG那条链还是它的互补链呢？  我想的是如果要翻译成功，那么mRNA上开端应该是AUG，那DNA模板链上就应该是AUG的互补链，对不对？
举个例子：1.假设我是这样连的，启动子+ATG…TGA+终止子，转录后mRNA上就变成了UAC，是不是不能启动翻译？
                2. 如果我连它的互补链，启动子+TAC…ACT+终止子，转录后mRNA上才会出现AUG，这样就启动翻译了。
我想了很久都没想明白，求大神指导。
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1楼 2014-07-21 15:09:42
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mochenmi

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by mochenmi at 2014-07-22 09:20:31
含有启动子的这条链不是反义链嘛？如果这条链连的是ATG，那转录出来的mRNA不就是TAC了？   还是说，启动子在正义链上？...

另外留个QQ行吗？
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4楼2014-07-22 09:41:02
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panda73

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2014-07-22 08:37:31
你的第一个假设是对的，具体原因，请仔细去读关于基因的正义链和反义链的概念，mRNA起始是以反义链为模板进行转录的，得到的mRNA序列与正义链序列一致（只是U和T的差别）。

另外，请注意，如果是在原核表达系统，请注意添加RBS序列，如果是在真核系统，请注意Kozak序列
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2楼2014-07-21 22:14:51
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mochenmi

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by panda73 at 2014-07-21 22:14:51
你的第一个假设是对的，具体原因，请仔细去读关于基因的正义链和反义链的概念，mRNA起始是以反义链为模板进行转录的，得到的mRNA序列与正义链序列一致（只是U和T的差别）。

另外，请注意，如果是在原核表达系统， ...

含有启动子的这条链不是反义链嘛？如果这条链连的是ATG，那转录出来的mRNA不就是TAC了？   还是说，启动子在正义链上？
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3楼2014-07-22 09:20:31
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