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mochenmi

铜虫 (小有名气)

[求助] 载体构建问题 已有1人参与

背景:我要连一个抗性基因到载体上,先要自己把启动子、抗性基因的ORF、终止子连接起来,然后再构到载体上去。抗性基因的ORF是ATG起始,TGA终止的。
现在有个问题是,启动子后面接的ORF应该是ATG那条链还是它的互补链呢?  我想的是如果要翻译成功,那么mRNA上开端应该是AUG,那DNA模板链上就应该是AUG的互补链,对不对?
举个例子:1.假设我是这样连的,启动子+ATG…TGA+终止子,转录后mRNA上就变成了UAC,是不是不能启动翻译?
                2. 如果我连它的互补链,启动子+TAC…ACT+终止子,转录后mRNA上才会出现AUG,这样就启动翻译了。
我想了很久都没想明白,求大神指导。
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panda73

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2014-07-22 08:37:31
你的第一个假设是对的,具体原因,请仔细去读关于基因的正义链和反义链的概念,mRNA起始是以反义链为模板进行转录的,得到的mRNA序列与正义链序列一致(只是U和T的差别)。

另外,请注意,如果是在原核表达系统,请注意添加RBS序列,如果是在真核系统,请注意Kozak序列
2楼2014-07-21 22:14:51
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mochenmi

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by panda73 at 2014-07-21 22:14:51
你的第一个假设是对的,具体原因,请仔细去读关于基因的正义链和反义链的概念,mRNA起始是以反义链为模板进行转录的,得到的mRNA序列与正义链序列一致(只是U和T的差别)。

另外,请注意,如果是在原核表达系统, ...

含有启动子的这条链不是反义链嘛?如果这条链连的是ATG,那转录出来的mRNA不就是TAC了?   还是说,启动子在正义链上?
3楼2014-07-22 09:20:31
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mochenmi

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by mochenmi at 2014-07-22 09:20:31
含有启动子的这条链不是反义链嘛?如果这条链连的是ATG,那转录出来的mRNA不就是TAC了?   还是说,启动子在正义链上?...

另外留个QQ行吗?
4楼2014-07-22 09:41:02
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