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nisiying0701

木虫 (正式写手)

stan

[求助] 蛋白中巯基和二硫键的测定 已有2人参与

测定总巯基含量时,15 mg蛋白样品溶解于5 mL含8 M 尿素的Tris-Gly 缓冲液(0.086 M Tris, 0.09 M Gly 和 0.04 M EDTA, pH 8.0)。测定自由巯基含量时,15 mg样品溶解于5 mL不含尿素的上述Tris-Gly 缓冲液中,而后加入50 μL Ellman 试剂 (DTNB, 即5,5-二硫基双2-硝基苯甲酸溶于Tris-Gly 缓冲液,4 mg/mL),在25℃条件下保温反应60 min, 离心(5000 g, 15 min),上清液在412 nm 处测定吸光值,以含Ellman 试剂的Tris-Gly 缓冲液为空白对照。
巯基含量的计算公式如下:
SH (μmol/g) = 73.53×A ×D/C
式中:A —除去试剂空白后样品的吸光度值
D—稀释倍数
C—样品浓度(mg/mL)

请教各位大神,这种方法中稀释倍数(D)和样品浓度(C)是多少?怎么得出的?万分感谢!!!!
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2438733717

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
11楼: Originally posted by 杨海侠 at 2016-02-29 11:28:16
我测的样品是灌肠,测得的结果是还原后的巯基小于还原前的巯基量,重复数次实验都是这种结果,请问是什么原因?...

亲,我也是这样,测得的总巯基小于游离巯基,请问你现在找到原因了吗?
12楼2017-05-14 17:48:02
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