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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】半胱氨酸在蛋白中是以二硫键形式存在还是以巯基存在的检测方法
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dudu1161

银虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】半胱氨酸在蛋白中是以二硫键形式存在还是以巯基存在的检测方法

如题，请帮忙指点，不胜感激！
我是原核表达的蛋白，该蛋白富含Cys，因此想检测下，Cys的存在形式（以二硫键形式存在还是以巯基存在），请教贵实验室用的方法，多谢指点！
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1楼 2011-02-17 10:26:58
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sdhxwp

金虫 (小有名气)
★
dudu1161(金币+1):谢谢参与
可以用DTNB，能和还原态的cys反应，无色的DTNB将被转变成黄色，产物在412有吸收，结合280的吸收，可以测定还原态的cys的个数。但如果cys被包埋的话就没法测了，不过可以变性后测。
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2楼2011-02-17 15:06:38
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wyhwawj_87

新虫 (初入文坛)
★
dudu1161(金币+1):谢谢参与
你的蛋白富含Cys，并且表达了是吗？！我现在也一直在做富含cys的多肽表达，不是很顺利啊，请教下经验，表达载体，宿主菌，或是方法，呵呵 ~~ 可以发我邮箱啊 wyhwawj_87@163.com  谢谢了
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3楼2011-03-30 20:33:12
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jjwl_rscn

金虫 (正式写手)
★
dudu1161(金币+1):谢谢参与
是不是两种官能团都有啊
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4楼2011-03-31 17:17:55
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cedefe

木虫 (正式写手)
★
dudu1161(金币+1):谢谢参与
半胱氨酸是，3-巯基-2-氨基丙酸，里面含有巯基；胱氨酸才是含有二硫键。
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5楼2011-07-25 10:02:58
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genius_liu

铜虫 (小有名气)
★
dudu1161(金币+1):谢谢参与
引用回帖:
1楼: Originally posted by dudu1161 at 2011-02-17 10:26:58:
如题，请帮忙指点，不胜感激！
我是原核表达的蛋白，该蛋白富含Cys，因此想检测下，Cys的存在形式（以二硫键形式存在还是以巯基存在），请教贵实验室用的方法，多谢指点！

DTNB能定量SH的量么？怎么定量呢？谢谢
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6楼2011-11-30 11:22:11
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genius_liu

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by sdhxwp at 2011-02-17 15:06:38:
可以用DTNB，能和还原态的cys反应，无色的DTNB将被转变成黄色，产物在412有吸收，结合280的吸收，可以测定还原态的cys的个数。但如果cys被包埋的话就没法测了，不过可以变性后测。

DTNB能定量SH的量么?怎么定量呢那？谢谢
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7楼2011-11-30 11:23:04
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我是科研狗

铜虫 (小有名气)
★
dudu1161(金币+1): 谢谢参与
引用回帖:
2楼: Originally posted by sdhxwp at 2011-02-17 15:06:38
可以用DTNB，能和还原态的cys反应，无色的DTNB将被转变成黄色，产物在412有吸收，结合280的吸收，可以测定还原态的cys的个数。但如果cys被包埋的话就没法测了，不过可以变性后测。

你好。反应过程能说的具体一点吗？有文献吗？
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8楼2015-03-31 10:34:44
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随风飘摇11

木虫 (著名写手)
★
dudu1161(金币+1): 谢谢参与
引用回帖:
2楼: Originally posted by sdhxwp at 2011-02-17 15:06:38
可以用DTNB，能和还原态的cys反应，无色的DTNB将被转变成黄色，产物在412有吸收，结合280的吸收，可以测定还原态的cys的个数。但如果cys被包埋的话就没法测了，不过可以变性后测。

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9楼2015-03-31 16:19:34
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