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dudu1161

银虫 (小有名气)


[交流] 【求助/交流】半胱氨酸在蛋白中是以二硫键形式存在还是以巯基存在的检测方法

如题,请帮忙指点,不胜感激!
我是原核表达的蛋白,该蛋白富含Cys,因此想检测下,Cys的存在形式(以二硫键形式存在还是以巯基存在),请教贵实验室用的方法,多谢指点!
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sdhxwp

金虫 (小有名气)



dudu1161(金币+1):谢谢参与
可以用DTNB,能和还原态的cys反应,无色的DTNB将被转变成黄色,产物在412有吸收,结合280的吸收,可以测定还原态的cys的个数。但如果cys被包埋的话就没法测了,不过可以变性后测。
2楼2011-02-17 15:06:38
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wyhwawj_87

新虫 (初入文坛)



dudu1161(金币+1):谢谢参与
你的蛋白富含Cys,并且表达了是吗?!我现在也一直在做富含cys的多肽表达,不是很顺利啊,请教下经验,表达载体,宿主菌,或是方法,呵呵 ~~ 可以发我邮箱啊 wyhwawj_87@163.com  谢谢了
3楼2011-03-30 20:33:12
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jjwl_rscn

金虫 (正式写手)



dudu1161(金币+1):谢谢参与
是不是两种官能团都有啊
4楼2011-03-31 17:17:55
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cedefe

木虫 (正式写手)



dudu1161(金币+1):谢谢参与
半胱氨酸是,3-巯基-2-氨基丙酸,里面含有巯基;胱氨酸才是含有二硫键。
5楼2011-07-25 10:02:58
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genius_liu

铜虫 (小有名气)



dudu1161(金币+1):谢谢参与
引用回帖:
1楼: Originally posted by dudu1161 at 2011-02-17 10:26:58:
如题,请帮忙指点,不胜感激!
我是原核表达的蛋白,该蛋白富含Cys,因此想检测下,Cys的存在形式(以二硫键形式存在还是以巯基存在),请教贵实验室用的方法,多谢指点!

DTNB能定量SH的量么?怎么定量呢?谢谢
6楼2011-11-30 11:22:11
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genius_liu

铜虫 (小有名气)


引用回帖:
2楼: Originally posted by sdhxwp at 2011-02-17 15:06:38:
可以用DTNB,能和还原态的cys反应,无色的DTNB将被转变成黄色,产物在412有吸收,结合280的吸收,可以测定还原态的cys的个数。但如果cys被包埋的话就没法测了,不过可以变性后测。

DTNB能定量SH的量么?怎么定量呢那?谢谢
7楼2011-11-30 11:23:04
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我是科研狗

铜虫 (小有名气)



dudu1161(金币+1): 谢谢参与
引用回帖:
2楼: Originally posted by sdhxwp at 2011-02-17 15:06:38
可以用DTNB,能和还原态的cys反应,无色的DTNB将被转变成黄色,产物在412有吸收,结合280的吸收,可以测定还原态的cys的个数。但如果cys被包埋的话就没法测了,不过可以变性后测。

你好。反应过程能说的具体一点吗?有文献吗?
8楼2015-03-31 10:34:44
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随风飘摇11

木虫 (著名写手)



dudu1161(金币+1): 谢谢参与
引用回帖:
2楼: Originally posted by sdhxwp at 2011-02-17 15:06:38
可以用DTNB,能和还原态的cys反应,无色的DTNB将被转变成黄色,产物在412有吸收,结合280的吸收,可以测定还原态的cys的个数。但如果cys被包埋的话就没法测了,不过可以变性后测。

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[ 发自小木虫客户端 ]
9楼2015-03-31 16:19:34
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