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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白电泳/WB » SDS胶蛋白条带不分离
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pencibox

新虫 (初入文坛)

[求助] SDS胶蛋白条带不分离 已有1人参与

最近在跑SDS-PAGE的时候发现，小分子蛋白几乎不分离，分离胶上半部分则完全没有蛋白。
如图所示，Marker中第一个条是209kDa，依次向下是124kDa，80kDa和49.1kDa，但在12.5%的蛋白胶里第一个条带应该在分离胶顶部，而不是中间。这样一来小分子蛋白几乎无法分离，像细胞裂解液之类的根本没法分析。

SDS胶蛋白条带不分离
SDS胶蛋白条带不分离-1

很明显胶的浓度比预想的要低很多。我们猜测了几种可能：
1.试剂过期
可以排除试剂的问题，因为实验室里的师兄用同样的试剂做出来没问题（O_O）
2.混合不当
已经用磁力搅拌器尽可能的混合了
3.操作
操作上也检查了好几遍，貌似只有我制胶的时候才会出现这样的问题，可大家都找不出问题在哪（T_T）

究竟是哪儿出了问题？哪儿最容易出错？很有可能是很小的错误，但我们实验室里几个人都没能发觉，希望有经验的虫友们给点帮助，谢谢啦~
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1楼 2014-07-09 05:04:18
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pencibox

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by egghurtsss at 2014-07-09 06:05:52
浓缩胶多了，分离胶少了

这点我们都知道，但谁都找不出来究竟是为什么，各种用量都对，也检查过，就是我自己做不出来T_T

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3楼2014-07-10 00:53:20
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egghurtsss

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
浓缩胶多了，分离胶少了

[ 发自小木虫客户端 ]
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2楼2014-07-09 06:05:52
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