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pencibox

新虫 (初入文坛)

[求助] SDS胶蛋白条带不分离 已有1人参与

最近在跑SDS-PAGE的时候发现,小分子蛋白几乎不分离,分离胶上半部分则完全没有蛋白。
如图所示,Marker中第一个条是209kDa,依次向下是124kDa,80kDa和49.1kDa,但在12.5%的蛋白胶里第一个条带应该在分离胶顶部,而不是中间。这样一来小分子蛋白几乎无法分离,像细胞裂解液之类的根本没法分析。

SDS胶蛋白条带不分离
SDS胶蛋白条带不分离-1

很明显胶的浓度比预想的要低很多。我们猜测了几种可能:
1.试剂过期
可以排除试剂的问题,因为实验室里的师兄用同样的试剂做出来没问题(O_O)
2.混合不当
已经用磁力搅拌器尽可能的混合了
3.操作
操作上也检查了好几遍,貌似只有我制胶的时候才会出现这样的问题,可大家都找不出问题在哪(T_T)

究竟是哪儿出了问题?哪儿最容易出错?很有可能是很小的错误,但我们实验室里几个人都没能发觉,希望有经验的虫友们给点帮助,谢谢啦~
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pencibox

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by egghurtsss at 2014-07-09 06:05:52
浓缩胶多了,分离胶少了

这点我们都知道,但谁都找不出来究竟是为什么,各种用量都对,也检查过,就是我自己做不出来T_T

[ 发自小木虫客户端 ]
3楼2014-07-10 00:53:20
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egghurtsss

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
浓缩胶多了,分离胶少了

[ 发自小木虫客户端 ]
2楼2014-07-09 06:05:52
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